公开(公告)号：CN114107163A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111536834.0

申请日：2021-12-15

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐章逸 ,  刘贤伟 ,  孙艺嘉 ,  边银丙

IPC: C12N1/36 ,  C12N1/38 ,  C12N1/14 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种真菌交叉脱毒方法，其为发育状态的待脱毒真菌菌株在有效浓度化学试剂作用足够长时间，使得菌株携带的病毒处于增殖抑制状态下，获取能培养成完整个体的部分真菌组织，经再生培养后检测筛选无毒菌株；所述真菌组织为含至少一份全基因组拷贝数的真菌部分；所述发育状态的真菌为真菌子实体之前的发育状态；所述化学试剂包括5‑二氢尿嘧啶DHT、病毒唑、放线菌酮、利福平、及盐酸吗啉胍一种或多种组合，所述真菌组织包括原生质体、菌丝尖端及菌丝碎片中一种，本发明提供的真菌交叉脱毒方法可在同一菌株中脱除多种病毒，脱毒周期短且复壮效果好，同样也适用于脱除未知病毒，可应用于病毒感染所致的菌株退化和/或制备复壮强的菌株。

公开(公告)号：CN114214462B

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202111612962.9

申请日：2021-12-27

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐章逸 ,  刘贤伟 ,  边银丙

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种香菇病毒快速检测试剂盒，所述检测试剂盒包括LePV1、LeV‑HKB、LeTyLV1和LeNSRV1四对引物。一种香菇病毒快速检测方法，包括以下步骤：S1提取待测供试菌株总RNA；S2多重RT‑PCR扩增：将S1获取的RNA稀释到RNA检测浓度，采用所述的香菇病毒快速检测试剂盒，进行多重RT‑PCR扩增；S3将S2获得的多重RT‑PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳和/或测序，获取待测供试菌株带毒结果。多重RT‑PCR反应体系中引物浓度为0.15‑0.35μmol/L，退火温度为55‑59℃，RNA检测浓度≥0.1ng/μL，扩增效果好。本发明提供的香菇病毒快速检测方法具有特异性好、适用性好的特点，可以同时检测单一菌株或混合菌株中的四种病毒。

公开(公告)号：CN114107163B

公开(公告)日：2024-04-26

申请号：CN202111536834.0

申请日：2021-12-15

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐章逸 ,  刘贤伟 ,  孙艺嘉 ,  边银丙

IPC: C12N1/36 ,  C12N1/38 ,  C12N1/14 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种真菌交叉脱毒方法，其为发育状态的待脱毒真菌菌株在有效浓度化学试剂作用足够长时间，使得菌株携带的病毒处于增殖抑制状态下，获取能培养成完整个体的部分真菌组织，经再生培养后检测筛选无毒菌株；所述真菌组织为含至少一份全基因组拷贝数的真菌部分；所述发育状态的真菌为真菌子实体之前的发育状态；所述化学试剂包括5‑二氢尿嘧啶DHT、病毒唑、放线菌酮、利福平、及盐酸吗啉胍一种或多种组合，所述真菌组织包括原生质体、菌丝尖端及菌丝碎片中一种，本发明提供的真菌交叉脱毒方法可在同一菌株中脱除多种病毒，脱毒周期短且复壮效果好，同样也适用于脱除未知病毒，可应用于病毒感染所致的菌株退化和/或制备复壮强的菌株。

公开(公告)号：CN114214462A

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN202111612962.9

申请日：2021-12-27

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 徐章逸 ,  刘贤伟 ,  边银丙

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种香菇病毒快速检测试剂盒，所述检测试剂盒包括LePV1、LeV‑HKB、LeTyLV1和LeNSRV1四对引物。一种香菇病毒快速检测方法，包括以下步骤：S1提取待测供试菌株总RNA；S2多重RT‑PCR扩增：将S1获取的RNA稀释到RNA检测浓度，采用所述的香菇病毒快速检测试剂盒，进行多重RT‑PCR扩增；S3将S2获得的多重RT‑PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳和/或测序，获取待测供试菌株带毒结果。多重RT‑PCR反应体系中引物浓度为0.15‑0.35μmol/L，退火温度为55‑59℃，RNA检测浓度≥0.1ng/μL，扩增效果好。本发明提供的香菇病毒快速检测方法具有特异性好、适用性好的特点，可以同时检测单一菌株或混合菌株中的四种病毒。