公开(公告)号：CN110819673B

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN201810888364.6

申请日：2018-08-07

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  刘方 ,  郑可

IPC: C12Q1/686

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原核生物cDNA5′末端快速扩增方法，包括如下步骤：（1）利用牛痘病毒加帽系统对原核生物总RNA进行加帽；（2）以莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶进行反转录；（3）向体系中加入含有3′末端含有3个单脱氧鸟嘌呤的特异性模板转换引物（TSO），与cDNA的胞嘧啶尾退火杂交，反转录以TSO为模板继续转录；（4）巢式PCR扩增，第一轮PCR引物为与TSO互补的外侧引物和GSP1，第二轮PCR引物为与TSO互补的内侧引物和GSP2。本发明为原核生物基因转录起始位点的鉴定提供了一种既简单又精确的方法。特别适用于低丰度转录本5′末端的快速、精确扩增。

公开(公告)号：CN110819673A

公开(公告)日：2020-02-21

申请号：CN201810888364.6

申请日：2018-08-07

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  刘方 ,  郑可

IPC: C12P19/34 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原核生物cDNA5′末端快速扩增方法，包括如下步骤：（1）利用牛痘病毒加帽系统对原核生物总RNA进行加帽；（2）以莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶进行反转录；（3）向体系中加入含有3′末端含有3个单脱氧鸟嘌呤的特异性模板转换引物（TSO），与cDNA的胞嘧啶尾退火杂交，反转录以TSO为模板继续转录；（4）巢式PCR扩增，第一轮PCR引物为与TSO互补的外侧引物和GSP1，第二轮PCR引物为与TSO互补的内侧引物和GSP2。本发明为原核生物基因转录起始位点的鉴定提供了一种既简单又精确的方法。特别适用于低丰度转录本5′末端的快速、精确扩增。

公开(公告)号：CN106544411A

公开(公告)日：2017-03-29

申请号：CN201610750135.9

申请日：2016-08-27

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 张淑君 ,  刘方 ,  周浩 ,  上官爱哨 ,  杨利国 ,  南良康 ,  梁秋曼

IPC: C12Q1/68 ,  G01N33/533 ,  G01N33/68 ,  G01N15/14

CPC classification number: G01N33/68 ,  C12Q1/686 ,  G01N15/14 ,  G01N33/533

Abstract: 本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种利用标识蛋白分析鉴定哺乳动物Y精子分型的方法。利用免疫荧光、免疫印迹和流式细胞仪分析，确定了在Y精子中表达和定位于Y精子顶体部分的基因蛋白TSPY。本发明的蛋白TSPY可在哺乳动物X和Y精子的分离中作为Y精子标识抗原蛋白应用。该Y精子标识蛋白TSPY可在哺乳动物精液中X和Y精子分离中作为Y精子标识抗原蛋白，所述的哺乳动物包括牛、羊、猪、兔、马等，但不包括人类。本发明的Y精子标识蛋白用于分离X和Y精子具有准确、快速、简便、成本低、设备简单、对精子伤害小等优势，适于动物生产中应用。