工程化的Cas12i核酸酶、效应蛋白及其用途

    公开(公告)号:CN117337326A

    公开(公告)日:2024-01-02

    申请号:CN202280035920.X

    申请日:2022-05-25

    IPC分类号: C12N9/22

    摘要: 本申请提供了一种工程化的Cas12i核酸酶;其包含一种或多种以下基于参比Cas12i核酸酶的突变:(1)将参比Cas12i核酸酶中与PAM相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸;和/或(2)将参比Cas12i核酸酶中参与打开DNA双链的一个或多个氨基酸替换为带芳香环的氨基酸;和/或(3)将参比Cas12i核酸酶中位于RuvC结构域并与单链DNA底物相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸;和/或(4)将参比Cas12i核酸酶中与DNA‑RNA双螺旋相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸;和/或(5)将参比Cas12i核酸酶中与DNA‑RNA双螺旋相互作用的一个或多个极性或带正电荷的氨基酸替换为疏水氨基酸。该工程化的Cas12i核酸酶较参比Cas12i核酸酶具有显著提高的基因编辑效率和/或显著降低的脱靶现象。