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公开(公告)号：CN104073519A
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201310101986.7
申请日：2013-03-27
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明公开了一种细胞穿透肽介导外源基因转化芸薹属植物小孢子的方法。本发明利用序列表序列1所示的细胞穿透肽将1000—10000bp的目的DNA转染经33℃高温预培养12—24小时的甘蓝型油菜或白菜的单核靠边期至双核早期游离小孢子，并在转染后再进行33℃高温预培养2天，经胚状体诱导培养和植株再生培养，可获得表达目的DNA的胚状体和基因组整合目的DNA的转基因植株，胚状体时期转化效率检测结果为6.5%—65.0%，再生植株时期PCR检测的阳性率为41.7%—49.0%。本发明为芸薹属植物小孢子转基因技术提供了一个有效的方法，对芸薹属植物相关基因功能研究和育种具有重要意义。
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公开(公告)号：CN104988177A
公开(公告)日：2015-10-21
申请号：CN201510355406.6
申请日：2015-06-24
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明提供了一种转基因西瓜植株的制备方法，属于转基因植物制备领域。该方法是利用转入外源基因的农杆菌侵染西瓜成熟子叶外植体；之后转入共培养基上培养，所述共培养基是由3层无菌滤纸和适量的液体共培养基组成；之后外植体转入筛选培养基，前期使用较低浓度的筛选剂，后期逐渐提高筛选剂浓度，经过芽伸长筛选、生根、炼苗、移栽，得到转入外源基因的西瓜植株，分子鉴定结果显示外源基因成功转入并能稳定表达。本发明方法提高外植体细胞活力，转化细胞数目多，转化细胞与再生细胞重叠性好，逃逸体频率低，转化率高，转基因植株生长健壮，生根好，驯化存活率高，适用于不同外源基因及农杆菌菌株类型转化，且重复性良好，具有良好的经济价值。
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公开(公告)号：CN100422314C
公开(公告)日：2008-10-01
申请号：CN200610112997.5
申请日：2006-09-14
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明公开了一种获得羽衣甘兰小孢子再生植株的方法及其专用培养基。该培养方法包括以下步骤：1)将小孢子接种于胚状体诱导培养基中，至终浓度为5×104-5×105个/mL，接着在30-35℃、黑暗条件下高温胁迫处理24-72小时后，再转入24-26℃、黑暗条件下诱导胚状体；2)待鱼雷期至子叶期胚状体形成后，将胚状体先在24-26℃、1500-2500Lux、14-18小时光照/天条件下继续培养5-10天，再将胚状体接种于分化培养基中，在相同条件下培养；3)长出茎、叶后，将植株转接入生根培养基中，在24-26℃、1500-2500Lux、14-18小时光照/天条件下进行生根培养，得到羽衣甘兰再生植株。本发明将在羽衣甘兰的繁育及其品种改良中发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN101126087A
公开(公告)日：2008-02-20
申请号：CN200710118535.9
申请日：2007-07-09
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明公开了一种培育抗黑腐病甘蓝类蔬菜的方法。该方法包括以下步骤：1)将对黑腐病具有抗性的黑芥(Brassica nigra)和甘蓝类蔬菜进行细胞融合，获得杂种细胞；2)离体培养所述杂种细胞，获得再生植株，得到对黑腐病具有抗性的甘蓝类蔬菜杂种。该方法利用细胞杂交技术，克服常规育种中的种间杂交障碍，将存在于十字花科野生材料黑芥中的抗病基因转入甘蓝类蔬菜基因组，培育得到抗病甘蓝类蔬菜，如具有黑腐病抗性的花椰菜。
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公开(公告)号：CN1769428A
公开(公告)日：2006-05-10
申请号：CN200410086701.8
申请日：2004-10-28
Applicant: 北京市农林科学院
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明公开了一种辣椒游离小孢子细胞团培养方法。该方法先对花药进行预培养，然后进行小孢子的游离培养。本发明在辣椒的游离小孢子培养体系上另辟蹊径，通过游离培养经预培养后的花药中的小孢子细胞及细胞团，获得了胚状体及其植株，显微镜检提供了胚状体的单细胞、单倍体发育途径的细胞学证据。该技术体系的建立，不仅是辣椒单倍体育种技术上的突破，而且该游离小孢子培养胚状体诱导体系还可能成为进行植物细胞分化、发育研究的良好实验体系。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104988177B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201510355406.6
申请日：2015-06-24
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明提供了一种转基因西瓜植株的制备方法，属于转基因植物制备领域。该方法是利用转入外源基因的农杆菌侵染西瓜成熟子叶外植体；之后转入共培养基上培养，所述共培养基是由3层无菌滤纸和适量的液体共培养基组成；之后外植体转入筛选培养基，前期使用较低浓度的筛选剂，后期逐渐提高筛选剂浓度，经过芽伸长筛选、生根、炼苗、移栽，得到转入外源基因的西瓜植株，分子鉴定结果显示外源基因成功转入并能稳定表达。本发明方法提高外植体细胞活力，转化细胞数目多，转化细胞与再生细胞重叠性好，逃逸体频率低，转化率高，转基因植株生长健壮，生根好，驯化存活率高，适用于不同外源基因及农杆菌菌株类型转化，且重复性良好，具有良好的经济价值。
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公开(公告)号：CN100339476C
公开(公告)日：2007-09-26
申请号：CN200410086701.8
申请日：2004-10-28
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明公开了一种辣椒游离小孢子细胞团培养方法。该方法先对花药进行预培养，然后进行小孢子的游离培养。本发明在辣椒的游离小孢子培养体系上另辟蹊径，通过游离培养经预培养后的花药中的小孢子细胞及细胞团，获得了胚状体及其植株，显微镜检提供了胚状体的单细胞、单倍体发育途径的细胞学证据。该技术体系的建立，不仅是辣椒单倍体育种技术上的突破，而且该游离小孢子培养胚状体诱导体系还可能成为进行植物细胞分化、发育研究的良好实验体系。
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公开(公告)号：CN101822156A
公开(公告)日：2010-09-08
申请号：CN201010125939.2
申请日：2010-03-16
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明公开了一种快速培育纯合抗虫兼抗除草剂转基因观赏甘蓝的方法。本发明培育转基因甘蓝的方法包括如下步骤：用含有目的基因的重组农杆菌侵染甘蓝的子叶，再进行共培养，得到转基因甘蓝。本发明中，在选择培养基上，转化处理后外植体的不定芽诱导率达48％，每个外植体上的再生芽数平均为1-2个，经分子鉴定确认，再生芽的转化频率达35％。人工饲喂小菜蛾幼虫的结果证明，获得的转基因再生株具有抗虫性，最好的抗性材料其幼虫致死率可达97％。自外植体的转化至纯合转基因抗性材料的获得，仅需要短暂的三年时间。
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公开(公告)号：CN1922986A
公开(公告)日：2007-03-07
申请号：CN200610112997.5
申请日：2006-09-14
Applicant: 北京市农林科学院
Abstract: 本发明公开了一种获得羽衣甘兰小孢子再生植株的方法及其专用培养基。该培养方法包括以下步骤：1)将小孢子接种于胚状体诱导培养基中，至终浓度为5×104－5×105个/mL，接着在30－35℃、黑暗条件下高温胁迫处理24－72小时后，再转入24－26℃、黑暗条件下诱导胚状体；2)待鱼雷期至子叶期胚状体形成后，将胚状体先在24－26℃、1500－2500Lux、14－18小时光照/天条件下继续培养5－10天，再将胚状体接种于分化培养基中，在相同条件下培养；3)长出茎、叶后，将植株转接入生根培养基中，在24－26℃、1500－2500Lux、14－18小时光照/天条件下进行生根培养，得到羽衣甘兰再生植株。本发明将在羽衣甘兰的繁育及其品种改良中发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN101822156B
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201010125939.2
申请日：2010-03-16
Applicant: 北京市农林科学院
IPC: C12N15/00 , C12N15/05 , A01H4/00 , A01G1/00 , A01N65/08 , A01P13/00 , A01P7/04 , C05G3/00 , C05G3/02
Abstract: 本发明公开了一种快速培育纯合抗虫兼抗除草剂转基因观赏甘蓝的方法。本发明培育转基因甘蓝的方法包括如下步骤：用含有目的基因的重组农杆菌侵染甘蓝的子叶，再进行共培养，得到转基因甘蓝。本发明中，在选择培养基上，转化处理后外植体的不定芽诱导率达48％，每个外植体上的再生芽数平均为1-2个，经分子鉴定确认，再生芽的转化频率达35％。人工饲喂小菜蛾幼虫的结果证明，获得的转基因再生株具有抗虫性，最好的抗性材料其幼虫致死率可达97％。自外植体的转化至纯合转基因抗性材料的获得，仅需要短暂的三年时间。
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