一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖含量的测定方法

    公开(公告)号:CN102809655B

    公开(公告)日:2014-05-21

    申请号:CN201210304908.2

    申请日:2012-08-26

    IPC分类号: G01N33/68 G01N33/561

    摘要: 本发明涉及一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖含量的测定方法,属生物技术领域。该方法在检品供试品的制备中采用蛋白酶K处理:酶解反应体系总体积为420μl,以总体积为基准,加入蛋白酶K、1/10体积的蛋白酶K缓冲液和1/6体积的超滤浓缩液,混匀后于孵育;加入的蛋白酶K的量为酶解反应体系中蛋白含量的2~8倍。本发明方法消除了各群结合物载体蛋白在免疫电泳中的影响,建立了检测4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖的适宜检测体系,提供了一种准确、快速测定4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖含量的方法,该方法具有耐用性强、准确性及精密度高的特点,建立了评价脑膜炎球菌多糖结合疫苗质量的方法。

    一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖含量的测定方法

    公开(公告)号:CN102809655A

    公开(公告)日:2012-12-05

    申请号:CN201210304908.2

    申请日:2012-08-26

    IPC分类号: G01N33/68 G01N33/561

    摘要: 本发明涉及一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖含量的测定方法,属生物技术领域。该方法在检品供试品的制备中采用蛋白酶K处理:酶解反应体系总体积为420µl,以总体积为基准,加入蛋白酶K、1/10体积的蛋白酶K缓冲液和1/6体积的超滤浓缩液,混匀后于孵育;加入的蛋白酶K的量为酶解反应体系中蛋白含量的2~8倍。本发明方法消除了各群结合物载体蛋白在免疫电泳中的影响,建立了检测4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖的适宜检测体系,提供了一种准确、快速测定4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群多糖含量的方法,该方法具有耐用性强、准确性及精密度高的特点,建立了评价脑膜炎球菌多糖结合疫苗质量的方法。

    一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖含量的测定方法

    公开(公告)号:CN102809656B

    公开(公告)日:2014-09-03

    申请号:CN201210304912.9

    申请日:2012-08-26

    IPC分类号: G01N33/68 G01N33/561

    摘要: 本发明涉及一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖含量的测定方法,属于生物技术领域。该方法在检品供试品的制备中进行蛋白酶K处理,加入的蛋白酶K量为酶解反应体系中蛋白的含量的2~8倍,还用冷酚处理即用乙酸钠饱和冷酚溶液分离结合物中结合多糖与游离多糖,与免疫电泳检测技术联合使用测得结合疫苗成品各群游离多糖的含量。本发明方法消除了各群结合物载体蛋白在免疫电泳中对电泳迁移率等相关因素的影响,有效地分离了结合物中结合多糖与游离多糖,建立了检测4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖的适宜检测体系,具有耐用性强、准确性及精密度高的特点,建立了评价4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品质量的方法。

    一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖含量的测定方法

    公开(公告)号:CN102809656A

    公开(公告)日:2012-12-05

    申请号:CN201210304912.9

    申请日:2012-08-26

    IPC分类号: G01N33/68 G01N33/561

    摘要: 本发明涉及一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖含量的测定方法,属于生物技术领域。该方法在检品供试品的制备中进行蛋白酶K处理,加入的蛋白酶K量为酶解反应体系中蛋白的含量的2~8倍,还用冷酚处理即用乙酸钠饱和冷酚溶液分离结合物中结合多糖与游离多糖,与免疫电泳检测技术联合使用测得结合疫苗成品各群游离多糖的含量。本发明方法消除了各群结合物载体蛋白在免疫电泳中对电泳迁移率等相关因素的影响,有效地分离了结合物中结合多糖与游离多糖,建立了检测4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖的适宜检测体系,具有耐用性强、准确性及精密度高的特点,建立了评价4个群以上脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品质量的方法。

    一种A、C群脑膜炎球菌多糖结合物中游离多糖含量的测定方法

    公开(公告)号:CN100578217C

    公开(公告)日:2010-01-06

    申请号:CN200610048876.9

    申请日:2006-12-06

    发明人: 黄镇 吴凯

    摘要: 本发明一种A、C群脑膜炎球菌多糖结合物中游离多糖含量的测定方法,属于生物技术领域,其步骤为:取A、C群脑膜炎球菌多糖结合物作为样1;取A、C脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物溶液为样3;取一定量A、C群脑膜炎球菌多糖结合物,加入冷酚溶液,充分振荡,离心收集上清液为样2;取一定量A、C脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物溶液,加入冷酚溶液,充分振荡,离心收集上清液为样4。A群脑膜炎球菌多糖结合物测定磷含量、C群脑膜炎球菌多糖结合物测定唾液酸含量,计算出样1、样2、样3、样4的多糖浓度,并利用公式计算游离多糖含量。本发明能准确、快速、简便测定出结合物中游离多糖的含量,从而评价制品质量。

    一种同时制备两种单克隆抗体的方法

    公开(公告)号:CN110804097A

    公开(公告)日:2020-02-18

    申请号:CN201911040763.8

    申请日:2019-10-30

    摘要: 本发明公开了一种同时制备两种单克隆抗体的方法,所述方法以33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物作为抗原免疫小鼠,选取免疫后抗体水平较高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,再通过33F肺炎多糖、乙肝表面蛋白以及33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白偶联物作为抗原进行特异性筛选,获得杂交瘤细胞,同时制备出特异性识别33F肺炎多糖和乙肝表面蛋白的单克隆抗体。本发明这种以乙肝表面蛋白为载体的肺炎偶联物免疫后同时制备分别针对多糖与蛋白的单克隆细胞株细胞及特异性单抗的方法,节省了工作量,提高筛选效率,同时本发明提供的两种单抗具有特异性高,敏感度高及传代稳定性好的优势。