公开(公告)号：CN115960958B

公开(公告)日：2025-03-11

申请号：CN202210907084.1

申请日：2022-07-29

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  许美娜 ,  蓝晋 ,  张充 ,  陈瑶生

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N15/877 ,  A01K67/0276

Abstract: 本发明公开了一种改变猫毛色的遗传修饰方法，其包括：利用CRISPR/Cas9技术靶向猫KIT基因第17号外显子进行基因编辑。本发明还提供了一种特异性靶向猫KIT基因第17号外显子的sgRNA、包含所述sgRNA的CRISPR/Cas9表达载体、及其在改变猫毛色中的用途。本发明应用CRISPR/Cas9技术编辑狸花猫的KIT基因第17号外显子，从而可以在狸花猫的基因组内实现精确的基因修饰，定向改变狸花猫的毛色性状，能够避免传统杂交育种过程中在改变毛色性状的同时，引入外来猫的血缘，影响狸花猫原有的外貌和特性，同时不引入任何外源DNA序列，有效避免了传统转基因技术可能产生的生物安全风险。

公开(公告)号：CN107142241B

公开(公告)日：2021-02-26

申请号：CN201710318430.1

申请日：2017-05-08

Applicant: 中山大学

Inventor： 丛佩清 ,  牛惠然 ,  张冰月 ,  蔡青青 ,  何祖勇

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了一种提高猪卵母细胞体外成熟质量和发育潜力的培养液及培养方法；所述培养液包括以下组分：毛喉素1～10μmol/L，曲古抑菌素A 50～150 nmol/L，TCM‑199 8～12 g/L，NaHCO3 1～4 g/L，D‑葡萄糖0.4～0.7 g/L，丙酮酸钠0.05～0.15 g/L，青霉素钠盐0.05～0.1 g/L，链霉素硫酸盐0.03～0.07 g/L，聚乙烯醇1～4 g/L，促黄体素0.3～0.7μg/mL，促卵泡素0.3～0.7μg/mL，表皮生长因子8～12 ng/mL，L‑半胱氨酸0.3～0.7 mmol/L，卵泡液8～12%；所述培养液可提高猪卵母细胞的卵裂率、囊胚数及囊胚细胞数，有效地提高体外培养的猪卵母细胞的发育潜力，具有较大的应用前景。

公开(公告)号：CN108753835A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810540915.X

申请日：2018-05-30

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  陈瑶生 ,  刘小红 ,  莫德林 ,  丛佩清 ,  石翾 ,  唐涛 ,  刘小凤

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N15/85

CPC classification number: C12N15/907 ,  C07K14/51 ,  C12N15/113 ,  C12N15/8509 ,  C12N2310/10 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9编辑猪BMP15基因的方法，包括在目的猪基因组的BMP15基因的外显子1上设计两条gRNA，分别构建至pX458和pX459载体，使BMP15基因发生DNA片段的精确删除而丧失功能。与单条gRNA介导的编辑相比，本发明的方法中外显子DNA片段的精确删除能够更加有效地使BMP15基因丧失功能。

公开(公告)号：CN118546939B

公开(公告)日：2025-03-18

申请号：CN202410672538.0

申请日：2024-05-28

Applicant: 中山大学

Inventor： 莫德林 ,  林翥鹄 ,  陈瑶生 ,  刘小红 ,  何祖勇 ,  王小宇 ,  梁子云 ,  袁仁强

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6888 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了猪MyoG基因的一个SNP突变位点，该SNP突变位点是位于猪MyoG基因上游启动子处、转录起始位点前299bp的SNP rs3471653254C>T突变。本发明还提供了所述SNP突变位点在提高猪瘦肉产量性能育种中的应用。本发明的SNP突变位点SNP rs3471653254C>T与猪原代成肌细胞分化成肌效率显著相关，可作为单碱基编辑位点进行基因编辑，在基因组中不引入任何的外源DNA的条件下可以使本地猪种保持基因组的“纯度”，既能最大限度地保留优良性状，又能特异性地提高其瘦肉率，大幅度提高优质猪肉生产和产量。

公开(公告)号：CN117363650A

公开(公告)日：2024-01-09

申请号：CN202310982060.7

申请日：2023-08-04

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  多田琦 ,  刘小红 ,  莫德林 ,  陈瑶生

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0275 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一种提高猪肌内脂肪含量的方法，其中，该方法包括在猪的IGF2基因内含子3的3071位点引入C>T单碱基突变。本发明还提供了一种gRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还提供了所述gRNA用于提高猪肌内脂肪含量的用途。本发明利用CBE3单碱基编辑技术编辑猪IGF2基因，通过基因编辑对中国地方猪种进行改良育种，能够特异地提高肌内脂肪含量，改善肉质品质，使猪兼具产肉量高、肉质佳的双重优点。

公开(公告)号：CN109576267A

公开(公告)日：2019-04-05

申请号：CN201811106425.5

申请日：2018-09-21

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  陈瑶生 ,  刘小红 ,  曾检华 ,  莫德林 ,  丛佩清 ,  刘小凤 ,  李瑞强

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种用于单碱基编辑的gRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用该gRNA，将IGF2基因相应位点的胞嘧啶突变为胸腺嘧啶，解除ZBED6对IGF2表达的抑制作用，提高产肉量。

公开(公告)号：CN108823248A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201810361154.1

申请日：2018-04-20

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  陈瑶生 ,  刘小红 ,  王敏 ,  刘小凤

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法。本发明采用在陆川猪基因组的CD163基因的外显子7上设计两条gRNA，分别构建至pX458和Px458R载体上，使CD163基因发生DNA片段的精确删除而破坏外显子7所编码的SRCR5半个结构域，从而获得抗PRRSV感染的CD163基因编辑猪。本发明的方法通过双荧光筛选能够更加有效地破坏CD163的SRCR5结构域。

公开(公告)号：CN118389444A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410589181.X

申请日：2024-05-13

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  焦亚飞 ,  丛佩清 ,  陈瑶生 ,  李心然 ,  郭津铭

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/89 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了一种缓解BMP15缺陷导致的卵母细胞体外成熟障碍的方法，所述方法包括在具有BMP15缺陷的卵母细胞的培养过程中添加槲皮素。本发明还提供了槲皮素在用于缓解BMP15缺陷导致的卵母细胞体外成熟障碍中的用途。本发明还提供了一种crRNA和tracrRNA复合物及其用于获得具有BMP15缺陷的卵母细胞中的用途。本发明利用ctRNP编辑系统在猪卵母细胞的BMP15基因中形成双链断裂，通过基因编辑获得了BMP15敲低卵母细胞群，在BMP15基因编辑后添加槲皮素可促进卵母细胞成熟和卵丘颗粒细胞扩展，增加卵母细胞成熟促进因子的活性以及纺锤体正确组装和细胞器功能，为BMP15缺陷导致的女性不孕提供了可行的治疗方案。

公开(公告)号：CN117887771A

公开(公告)日：2024-04-16

申请号：CN202410061068.4

申请日：2024-01-15

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  焦亚飞 ,  丛佩清 ,  朱奕舟 ,  陈瑶生

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种提高卵巢颗粒细胞对促卵泡素敏感性的方法，其中，该方法包括在卵巢颗粒细胞的BMPR1B基因引入第746位碱基发生了A＞G的突变。本发明还提供了一种gRNA和ssODN，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3所示。本发明还提供了所述gRNA和ssODN用于提高卵巢颗粒细胞对促卵泡素敏感性的用途。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑系统和ssODN同源重组编辑技术编辑人卵巢颗粒细胞COV434的BMPR1B基因，通过基因编辑获得了FecBB点突变细胞系，该细胞系能够增加对促卵泡素的敏感性。

公开(公告)号：CN108424929A

公开(公告)日：2018-08-21

申请号：CN201810063376.5

申请日：2018-01-23

Applicant: 中山大学

Inventor： 何祖勇 ,  陈瑶生 ,  刘小红 ,  刘红波 ,  石翾 ,  秦珂 ,  刘小凤

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供了一种猪MC1R基因的Cas9/sgRNA共表达载体，其包括pX458载体以及连接在pX458载体上的靶向猪MC1R基因的sgRNA，靶向猪MC1R基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明可以在猪的基因组内实现精确的基因修饰，同时不引入任何外源DNA序列，保留其肉质优良、口感好等优良性状，有效地避免了传统转基因技术可能产生的生物安全风险。