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公开(公告)号：CN117821600A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202311603982.9
申请日：2023-11-28
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , G16B25/20
摘要： 本发明提供了一种中华鲟实时荧光定量PCR内参基因及其筛选方法和应用，属于基因工程领域。所述的内参基因为GAPDH、EF1α和RPS18中的至少两种组合。本发明通过中华鲟的转录组数据库，选择了常用作鱼类内参基因的8个候选基因。通过5种算法评估候选内参基因的稳定性，获得了中华鲟不同组织中稳定表达的荧光定量内参基因，同时评估了候选内参基因在微塑料处理条件下在中华鲟不同组织中的表达稳定性。本发明设计的内参基因引物具有适用性广、扩增效率高、在健康组和处理组的中华鲟个体中均能稳定表达的优点，解决了中华鲟荧光定量PCR研究中缺乏稳定有效内参基因的问题。
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公开(公告)号：CN117327803A
公开(公告)日：2024-01-02
申请号：CN202311450085.9
申请日：2023-11-02
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
摘要： 本发明提供了一种鉴定长鳍吻鮈和吻鮈的COI引物对，试剂盒及鉴定方法，属于动物分子遗传学领域。本试剂盒利用2对线粒体COI序列特异性引物PCR反应后在长鳍吻鮈和吻鮈之间存在PCR扩增条带差异，通过凝胶电泳显示直接鉴定出长鳍吻鮈和吻鮈。本发明在鲤科吻鮈属两种鱼类中2对引物的PCR扩增、进行凝胶电泳显示直接进行分析鉴定，具有实验准确，鉴定可靠快捷，操作简便等有点。利用本方法可以快速鉴别长鳍吻鮈和吻鮈两个物种，对长鳍吻鮈规模化放流的种质鉴定提供技术支撑。
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公开(公告)号：CN111763723B
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202010519970.8
申请日：2020-06-09
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6879 , C12Q1/6851
摘要： 本发明公开了一种中华鲟无损伤性别鉴定方法，采用TRIZOl裂解法提取中华鲟腹鳍鳍条总RNA；逆转录获得中华鲟腹鳍鳍条模板cDNA；设计中华鲟透明带糖蛋白zp3.2特异性引物和内参基因β‑actin特异性引物；反应程序：95℃变性3 s，60℃退火30 s，72℃延伸反应25 s，40次循环，实施qPCR。根据qPCR的结果分析，若中华鲟腹鳍ΔCt值（Ctzp3.2‑Ctβ‑actin）在6.32～8.33区间内，则判断中华鲟个体为雌性，若中华鲟腹鳍ΔCt值（Ctzp3.2‑Ctβ‑actin）在9.09～11.63区间内，则判断中华鲟个体为雄性；采用内窥镜技术对本发明方法鉴定不同年龄群体中华鲟性别进行验证，准确率在78%以上。本发明方法可以快速有效的对中华鲟2龄及以上个体进行雌雄性别鉴定，相较于传统手术鉴定方法对中华鲟伤害极小，且可鉴别年龄更早。
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公开(公告)号：CN113186300A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110475593.7
申请日：2021-04-29
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12Q1/686 , C12N15/12 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种快速鉴定中华鲟遗传性别的基因组序列片段ZHXF‑2及其应用。本发明公开了一段雌性中华鲟序列，雌性中华鲟基因组特异性片段ZHXF‑2如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列，雌雄基因组DNA可扩增出的阳性参考DNA片段如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。利用本发明提供的PCR反应体系，对待测中华鲟进行PCR扩增，当扩增结果片段为985bp和317bp两条条带时，则待测中华鲟为雌性。当PCR扩增结果仅可扩增出317bp一条条带时，待测中华鲟为雄性。本发明提供的中华鲟序列片段可以快速有效鉴定中华鲟雌雄。利用本方法可以有效提高中华鲟养殖效率，进一步提高中华鲟养殖合理性，人为调节养殖中华鲟雌雄比例，更为合理的利用养殖中华鲟的人力、物力和财力。
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公开(公告)号：CN111763723A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010519970.8
申请日：2020-06-09
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6879 , C12Q1/6851
摘要： 本发明公开了一种中华鲟无损伤性别鉴定方法，采用TRIZOl裂解法提取中华鲟腹鳍鳍条总RNA；逆转录获得中华鲟腹鳍鳍条模板cDNA；设计中华鲟透明带糖蛋白zp3.2特异性引物和内参基因β-actin特异性引物；反应程序：95℃变性3 s，60℃退火30 s，72℃延伸反应25 s，40次循环，实施qPCR。根据qPCR的结果分析，若中华鲟腹鳍ΔCt值（Ctzp3.2-Ctβ-acti）n在6.32～8.33区间内，则判断中华鲟个体为雌性，若中华鲟腹鳍ΔCt值（Ctzp3.2-Ctβ-actin）在9.09～11.63区间内，则判断中华鲟个体为雄性；采用内窥镜技术对本发明方法鉴定不同年龄群体中华鲟性别进行验证，准确率在78%以上。本发明方法可以快速有效的对中华鲟2龄及以上个体进行雌雄性别鉴定，相较于传统手术鉴定方法对中华鲟伤害极小，且可鉴别年龄更早。
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公开(公告)号：CN117770189B
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202311263504.8
申请日：2023-09-27
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
摘要： 一种适用开口期中华鲟的水蚯蚓自动投喂装置，包括竖直固定在养殖池中的若干装料桶，装料桶顶部螺接有网盖，侧面捆扎固定至少有两个吸盘，吸盘吸附固定在养殖池的侧壁上，装料桶下方刚性连接有进气口，进气口中固定安装有气石，气石上可拆卸安装有曝气管，曝气管另一端连接空气泵，空气泵的出口设置有调节阀；采用本装置投喂时，先将水蚯蚓装入到装料桶中，再通过空气泵输送气体到气石中曝气，打散水蚯蚓并释放到养殖池中，同时还可以通过设置空气泵出口的调节阀，调节曝气量来调节水蚯蚓投放的速率和密度，从而保证了水蚯蚓投放的均匀性和连续性，提高了水蚯蚓的利用率，降低了人工喂养的频次，提升了中华鲟幼苗开口期的喂养质量和生长速率。
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公开(公告)号：CN115927576A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211228080.7
申请日：2022-10-09
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6879 , C12Q1/686 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法，公开了一段达氏鲟基因组序列，利用该序列可以进行达氏鲟的雌雄鉴定。本发明还公开了在达氏鲟雌雄基因组DNA均可扩增出的阳性参考DNA片段。引物为提供的序列设计而成，利用引物对待测达氏鲟DNA进行PCR扩增，当扩增结果的产物在琼脂糖凝胶上显示的结果为3个条带时，则待测达氏鲟为雌性，当扩增结果的产物在琼脂糖凝胶上显示的结果为2个条带时，则待测达氏鲟为雄性。或者当扩增结果片段出现1402bp条带时，则待测达氏鲟为雌性，不出现1402bp条带时为雄性达氏鲟。本发明提供的达氏鲟序列片段可以快速有效鉴定达氏鲟雌雄，有效提高达氏鲟养殖效率和养殖合理性，人为调节养殖达氏鲟雌雄比例。
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公开(公告)号：CN113186300B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202110475593.7
申请日：2021-04-29
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/6879 , C12Q1/686 , C12N15/12 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种快速鉴定中华鲟遗传性别的基因组序列片段ZHXF‑2及其应用。本发明公开了一段雌性中华鲟序列，雌性中华鲟基因组特异性片段ZHXF‑2如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列，雌雄基因组DNA可扩增出的阳性参考DNA片段如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。利用本发明提供的PCR反应体系，对待测中华鲟进行PCR扩增，当扩增结果片段为985bp和317bp两条条带时，则待测中华鲟为雌性。当PCR扩增结果仅可扩增出317bp一条条带时，待测中华鲟为雄性。本发明提供的中华鲟序列片段可以快速有效鉴定中华鲟雌雄。利用本方法可以有效提高中华鲟养殖效率，进一步提高中华鲟养殖合理性，人为调节养殖中华鲟雌雄比例，更为合理的利用养殖中华鲟的人力、物力和财力。
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公开(公告)号：CN117050944A
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202311116190.9
申请日：2023-08-31
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12N5/079
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种重口裂腹鱼下丘脑细胞体外培养方法，通过该发明可以获得数量多、纯度高的下丘脑细胞。一般细胞培养采用组织块牵引法，细胞培养周期长并且细胞数量少；再加上神经元细胞培养的特殊性，一般很难大量获得下丘脑神经元细胞。而且该发明方法通过申请人自己配置的神经元培养液可以增强下丘脑细胞的活性。通过此方法获得下丘脑神经元细胞可以进行基因功能验证和种质资源保存等相关实验，对重口裂腹鱼分子功能机制的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114941034A
公开(公告)日：2022-08-26
申请号：CN202210612127.3
申请日：2022-05-27
申请人： 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
摘要： 本发明提供了一种鉴定圆口铜鱼和铜鱼的COI引物对，试剂盒及鉴定方法，属于动物分子遗传学领域。试剂盒利用1对线粒体COI序列特异性引物对鱼类样本进行PCR扩增反应，反应后发现PCR扩增条带在圆口铜鱼和铜鱼之间存在具有较大差异，通过凝胶电泳显示可以直接鉴定出圆口铜鱼和铜鱼。本发明在鲤科铜鱼属的两种鱼类中设计1对引物进行PCR扩增、凝胶电泳显示直接进行分析鉴定，具有实验准确，鉴定可靠快捷，操作简便等优点。利用本方法可以快速鉴别圆口铜鱼和铜鱼两个物种，对圆口铜鱼规模化放流的种质鉴定提供了技术支撑。
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