本发明提供了一种鉴定长鳍吻鮈和吻鮈的COI引物对，试剂盒及鉴定方法，属于动物分子遗传学领域。本试剂盒利用2对线粒体COI序列特异性引物PCR反应后在长鳍吻鮈和吻鮈之间存在PCR扩增条带差异，通过凝胶电泳显示直接鉴定出长鳍吻鮈和吻鮈。本发明在鲤科吻鮈属两种鱼类中2对引物的PCR扩增、进行凝胶电泳显示直接进行分析鉴定，具有实验准确，鉴定可靠快捷，操作简便等有点。利用本方法可以快速鉴别长鳍吻鮈和吻鮈两个物种，对长鳍吻鮈规模化放流的种质鉴定提供技术支撑。