公开(公告)号：CN102175809A

公开(公告)日：2011-09-07

申请号：CN201110027512.3

申请日：2011-01-26

Applicant: 中国药科大学

Inventor： 王广基 ,  阿基业 ,  曹蓓 ,  刘林生 ,  石建 ,  郑天 ,  李梦婕 ,  王新文 ,  赵春艳 ,  张凤逸

IPC: G01N30/88 ,  G01N27/62 ,  G01N24/08 ,  G01N1/28 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了“细胞代谢物相对含量作为细胞数量指标进行数据校正的新方法”。其特征在于采用简便的样品前处理方法实现细胞内生化代谢的快速猝灭；通过优化提取溶剂以高效提取细胞内小分子代谢物；再利用基于质谱、核磁共振等测定技术的代谢组学方法全面、半定量测定生物样本中小分子化合物，鉴定出的细胞内标志性代谢物作为细胞数量的定量指标，以此作为权重因子进行数据校正。与现有细胞数量的定量指标相比，该方法简便、快捷、重现性好，减少了额外的实验工作和由此引入的误差，增强了实验结果的准确性和可靠性，解决了体外培养细胞数相对定量的难题，为细胞代谢组学和相关研究提供了一个新的替代方法，可广泛用于细胞分子生物学领域的相关研究。

公开(公告)号：CN104928350A

公开(公告)日：2015-09-23

申请号：CN201510136327.6

申请日：2015-03-24

Applicant: 中国药科大学

Inventor： 王广基 ,  彭英 ,  孙建国 ,  吴慧 ,  张雪媛 ,  冯冬 ,  祁欢欢 ,  张凤逸 ,  仲云熙 ,  肖亚楠 ,  尤国皎

IPC: C12Q1/26

Abstract: 本发明公开了应用14种探针底物与16种探针反应全面评估9种人肝CYP450代谢酶体外抑制效应的快速筛选方法。本发明主要涉及采用体外混合探针孵育法与LC/MS/MS联用监测9种人肝CYP450酶的代谢活性变化，快速全面的评估受试化合物对代谢酶的抑制效应。该方法综合考虑了探针底物的专一性与多样性，探针底物之间的相互影响、温孵体系中不同孵育条件(有机溶剂、缓冲液、BSA的加入等)对探针反应的活性影响，以及16种探针反应在所选孵育条件下的酶动力学特征等各项因素，并结合高灵敏度、高选择性的LC-MS/MS技术，建立了一种全新的体外评估体系，以期在新药开发的高通量筛选中能更准确更全面的预测受试化合物对9种人肝主要代谢酶可能产生的抑制效应，提高后期代谢性相互作用的预见性。

公开(公告)号：CN104928350B

公开(公告)日：2017-11-14

申请号：CN201510136327.6

申请日：2015-03-24

Applicant: 中国药科大学

Inventor： 王广基 ,  彭英 ,  孙建国 ,  吴慧 ,  张雪媛 ,  冯冬 ,  祁欢欢 ,  张凤逸 ,  仲云熙 ,  肖亚楠 ,  尤国皎

IPC: C12Q1/26

Abstract: 本发明公开了应用14种探针底物与16种探针反应全面评估9种人肝CYP450代谢酶体外抑制效应的快速筛选方法。本发明主要涉及采用体外混合探针孵育法与LC/MS/MS联用监测9种人肝CYP450酶的代谢活性变化，快速全面的评估受试化合物对代谢酶的抑制效应。该方法综合考虑了探针底物的专一性与多样性，探针底物之间的相互影响、温孵体系中不同孵育条件(有机溶剂、缓冲液、BSA的加入等)对探针反应的活性影响，以及16种探针反应在所选孵育条件下的酶动力学特征等各项因素，并结合高灵敏度、高选择性的LC‑MS/MS技术，建立了一种全新的体外评估体系，以期在新药开发的高通量筛选中能更准确更全面的预测受试化合物对9种人肝主要代谢酶可能产生的抑制效应，提高后期代谢性相互作用的预见性。