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公开(公告)号：CN115960186A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202211730994.3
申请日：2022-12-30
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
IPC分类号： C07K14/37 , C12N15/31 , C12N15/90 , C12N1/15 , C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12R1/77
摘要： 本发明公开一种蛋白FocVPS41在调控香蕉枯萎菌致病力中的应用，本发明利用同源重组方法将FocVPS41基因从香蕉枯萎菌中敲除，获得敲除突变体ΔFocVPS41；试验结果表明，与Foc4相比，ΔFocVPS41菌落直径变小且产孢量显著降低，对细胞壁胁迫因子刚果红耐受性下降，而提高了对渗透压调节剂山梨醇和农药氰烯菌酯耐受性；ΔFocVPS41的缺失使Foc4的致病力显著降低。本发明证实FocVPS41是香蕉枯萎菌分生孢子的产生、应对细胞壁胁迫、渗透压胁迫、杀菌剂氰烯菌酯等胁迫因子以及致病性等方面所必需的。
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公开(公告)号：CN114774459B
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202210606127.2
申请日：2022-05-31
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明提供一种香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑载体、制备方法及应用,该载体包括Cas9和sgRNA表达框；Cas9表达框中，包括PgpdA启动子、优化密码子Foc4‑Cas9和密码子Foc4‑Cas9两端携带的H2BNLS核定位信号；sgRNA表达框中，包括Pol III型5SrRNA启动子和gRNA序列N20；本发明构建的香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑载体，实现了香蕉枯萎菌Foc4的更高编辑效率的体内表达Cas9和sgRNA的质粒型CRISPR/Cas9基因编辑技术，操作简便且稳定，充分提高香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑效率。
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公开(公告)号：CN115011615B
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202210606644.X
申请日：2022-05-31
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明提供一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS及其应用，该内源报告基因carS为香蕉枯萎病菌4号生理小种Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085，其具有RING‑finger蛋白结构域，经试验结果表明，Foc4carS基因在次生代谢产物类胡萝素的生物形成中发挥重要作用，Foc4ΔcarS敲除突变体仅菌落颜色发生改变呈现深橙色，不影响病原菌的生长、产孢及致病力，基因回补后即可恢复表型，是Foc4良好的内源报告基因，为病原菌的功能基因组学提供有力的技术支撑。
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公开(公告)号：CN114854776A
公开(公告)日：2022-08-05
申请号：CN202210596594.1
申请日：2022-05-30
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明公开了香蕉枯萎病菌4号生理小种chitin synthase 6基因的用途。具体提出香蕉枯萎病菌4号生理小种CHS6基因在病原菌抗药性、致病性及厚垣孢子形成过程中的应用。CHS6基因可以提高病原菌致病力，以及调控厚垣孢子的形成。本发明研究成果可为香蕉枯萎病菌对氰烯菌酯类杀菌剂的抗药性及其致病机制的研究提供依据。
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公开(公告)号：CN115851805A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211345336.2
申请日：2022-10-31
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明公开一种利用体外重组技术构建的香蕉枯萎菌基因敲除突变体回补载体及其应用，回补载体的构建步骤为：1)将初始载体上的抗性基因分别替换为HYG抗性基因或NEO抗性基因，构建成中间载体；2)扩增ptef1启动子序列、3GFP序列和终止子序列；(3)将中间载体双酶切成线性化载体后，与ptef1启动子序列、3GFP序列和终止子序列进行体外重组，构建成回补载体。本发明构建的回补载体，不需要酵母体内重组转化，避免了酵母体内重组步骤繁琐，操作简便，减少时间。采用本发明回补载体基因表达量更高，回补菌株能够表达更加强烈的荧光信号，更加有利于亚细胞定位观察。
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公开(公告)号：CN115011615A
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202210606644.X
申请日：2022-05-31
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明提供一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS及其应用，该内源报告基因carS为香蕉枯萎病菌4号生理小种Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085，其具有RING‑finger蛋白结构域，经试验结果表明，Foc4carS基因在次生代谢产物类胡萝卜素的生物形成中发挥重要作用，Foc4ΔcarS敲除突变体仅菌落颜色发生改变呈现深橙色，不影响病原菌的生长、产孢及致病力，基因回补后即可恢复表型，是Foc4良好的内源报告基因，为病原菌的功能基因组学提供有力的技术支撑。
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公开(公告)号：CN116445554A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310150744.0
申请日：2023-02-22
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明公开一种利用酵母同源重组系统构建的香蕉枯萎菌基因敲除突变体回补载体及其应用，所述回补载体包括以下构建步骤：(1)扩增PgpdA启动子序列；(2)扩增eGFP序列；(3)融合扩增产物；(4)利用酵母同源重组系统构建中间载体；(5)利用酵母同源重组系统构建回补载体：扩增HYG或NEO抗性基因表达框，将扩增产物与线性化的中间载体共转化进入酵母细胞，构建重组质粒，得到回补载体。本发明构建的回补载体采用酵母体内重组方法，避免了部分基因的毒性作用，具有更加广谱的应用范围。本发明回补载体中导入PgpdA启动子，明显提高基因表达量，回补菌株能够表达更加强烈的eGFP荧光信号，更加有利于亚细胞定位观察。
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公开(公告)号：CN114774459A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210606127.2
申请日：2022-05-31
申请人： 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
摘要： 本发明提供一种香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑载体、制备方法及应用,该载体包括Cas9和sgRNA表达框；Cas9表达框中，包括PgpdA启动子、优化密码子Foc4‑Cas9和密码子Foc4‑Cas9两端携带的H2BNLS核定位信号；sgRNA表达框中，包括Pol III型5SrRNA启动子和gRNA序列N20；本发明构建的香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑载体，实现了香蕉枯萎菌Foc4的更高编辑效率的体内表达Cas9和sgRNA的质粒型CRISPR/Cas9基因编辑技术，操作简便且稳定，充分提高香蕉枯萎菌CRISPR/Cas9基因编辑效率。
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