检测外周血抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN1245628C

    公开(公告)日:2006-03-15

    申请号:CN01115916.2

    申请日:2001-05-22

    Inventor: 王恒

    Abstract: 本发明涉及一种检测外周血抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的新方法,包括构建和制备MHC I类分子的突变体蛋白,通过体外孵育得到MHC I类分子突变体-肽复合物,将所述复合物与光交联剂化学交联,使已经交联了光交联剂的复合物与样品中所要检测的抗原特异性CTLs相互结合,在温和条件下进行光交联而将MHC I类分子突变体-肽复合物不可逆地共价结合在CTL表面的TCR上,随后用免疫荧光检测抗原特异性CTL。本发明还涉及使用所述方法的试剂盒及其应用。

    检测外周血抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN1387046A

    公开(公告)日:2002-12-25

    申请号:CN01115916.2

    申请日:2001-05-22

    Inventor: 王恒

    Abstract: 本发明涉及一种检测外周血抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的新方法,包括构建和制备MHC I类分子的突变体蛋白,通过体外孵育得到MHC I类分子突变体-肽复合物,将所述复合物与光交联剂化学交联,使已经交联了光交联剂的复合物与样品中所要检测的抗原特异性CTLs相互结合,在温和条件下进行光交联而将MHC I类分子突变体-肽复合物不可逆地共价结合在CTL表面的TCR上,随后用免疫荧光检测抗原特异性CTL。本发明还涉及使用所述方法的试剂盒及其应用。

    一种乙脑病毒SA14-14-2的克隆方法及应用

    公开(公告)号:CN110656120A

    公开(公告)日:2020-01-07

    申请号:CN201910983991.2

    申请日:2019-10-16

    Abstract: 本发明提供了一种乙脑病毒SA14-14-2的克隆方法:根据NCBI公布的D90195.1基因序列为参照分别合成6段基因序列,利用同源重组技术通过相应酶切位点将合成序列依次克隆至线性化载体中,获得乙脑病毒SA14-14-2的全长克隆。本发明采用同源重组技术,可简单、快速并且高效的将插入片段定向克隆至载体任意位点。仅需将插入片段正/反向引物5’端引入线性化载体的末端序列,使之包含载体的同源臂,后按一定比例混合,在重组酶催化下,37℃反应30min即可完成,极大的节约了连接时间。同时由于独特的非连接酶依赖体系,极大降低了载体自连背景,同时对杂质的耐受度增加,提高了其阳性率并简化了实验步骤。

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