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公开(公告)号：CN114717204B
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202210220569.3
申请日：2022-03-08
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/869 , A61K39/245 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一种复制缺陷型伪狂犬病病毒构建方法和应用。所述的复制缺陷型伪狂犬病病毒是在包含PRV全基因组的BAC感染性克隆的基础上，将其中的gB基因编码序列中的第151或196位精氨酸突变为终止密码子TGA后得到的。本发明用tRNA反密码子编辑(Anticodon‑engineeredtransferRNAs，ACE‑tRNAs)技术实现DNA病毒提前终止密码子(Prematurestopcodon，PTC)的高效通读并应用于动物病毒疫苗的研究。证明了基于ACE‑tRNAs技术研究的复制缺陷病毒作为疫苗应用的可行性。本发明的提出为伪狂犬病病毒的防治提供了一种新的技术手段，同时也为解决一直困扰人们的疫苗安全性和有效性的问题提供了一种新的思路，代表了一种有前途的疫苗研究工具，为其它疫苗研究困难的病毒新型疫苗开发打开一扇新的大门。
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公开(公告)号：CN112011556B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202010780803.9
申请日：2020-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN113321712A
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202110819705.6
申请日：2021-07-20
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K14/08 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 一组猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗原多肽及其应用，它涉及生物检测技术领域，本发明要解决在血清学上无法有效区分疫苗免疫和野毒感染的PRRS基因工程标记弱毒疫苗的问题，本发明的抗原肽是由序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2中的一种或者两种所示的多肽组成的组合物。它用于制备ELISA诊断试剂盒。本发明筛选可用于鉴别诊断的蛋白多肽，并建立相应的间接ELISA检测方法。为今后PRRS基因工程标记弱毒疫苗株提供候选标签蛋白，为PRRS疫苗株和野毒株的鉴别诊断提供技术支持。本发明应用于猪用疫苗及诊断领域。
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公开(公告)号：CN111471102B
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202010325058.9
申请日：2020-04-23
Applicant: 西北农林科技大学 , 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明适用于生物技术领域，提供了一种编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用，该抗独特型纳米抗体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。该抗独特型纳米抗体是通过噬菌体展示技术成功筛选到所需抗独特型纳米抗体的编码基因，接着，将该编码基因连接到毕赤酵母表达载体中，并电转化至毕赤酵母感受态细胞培养制得的。该抗独特型纳米抗体能够特异性地阻断单抗1E7与PCV2 Cap蛋白的结合，具有模拟PCV2 Cap关键抗原表位的作用，其可用于开发防治PCV2的抗独特性纳米抗体疫苗、诊断试剂及生物试剂等。
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公开(公告)号：CN112011556A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010780803.9
申请日：2020-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117965585B
公开(公告)日：2024-07-16
申请号：CN202410370650.9
申请日：2024-03-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N15/70 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/34 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61K39/39 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法，属于生物制药技术领域。解决了PCV2d型病毒样颗粒在大肠杆菌中难以高效和可溶性表达，抗体产生时间较长等问题。本发明通过在PCV2d的ORF2基因优化序列的N端添加C3d特异性表位基因序列来提高猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗的免疫效果，基于该方法获得了核苷酸序列SEQ2。进一步，通过将PCV2d的ORF2基因序列优化并在N端添加C3d特异性表位基因序列，插入pET28a载体，再转化到大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达蛋白rC3d‑Cap。最后，疫苗的制备方法是将所述蛋白rC3d‑Cap通过硫酸铵沉淀技术、AKTA蛋白纯化系统和分子筛进行纯化，在与水包油佐剂进行乳化，获得的一种猪圆环病毒PCV2d病毒样颗粒疫苗。本发明适用于疫苗生产加工技术领域。
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公开(公告)号：CN117965585A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410370650.9
申请日：2024-03-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N15/70 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/34 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61K39/39 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法，属于生物制药技术领域。解决了PCV2d型病毒样颗粒在大肠杆菌中难以高效和可溶性表达，抗体产生时间较长等问题。本发明通过在PCV2d的ORF2基因优化序列的N端添加C3d特异性表位基因序列来提高猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗的免疫效果，基于该方法获得了核苷酸序列SEQ2。进一步，通过将PCV2d的ORF2基因序列优化并在N端添加C3d特异性表位基因序列，插入pET28a载体，再转化到大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达蛋白rC3d‑Cap。最后，疫苗的制备方法是将所述蛋白rC3d‑Cap通过硫酸铵沉淀技术、AKTA蛋白纯化系统和分子筛进行纯化，在与水包油佐剂进行乳化，获得的一种猪圆环病毒PCV2d病毒样颗粒疫苗。本发明适用于疫苗生产加工技术领域。
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公开(公告)号：CN114656553A
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202210267146.7
申请日：2022-03-17
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/08 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一株识别非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72蛋白的单克隆抗体、含有该单克隆抗体的试剂盒及其应用。其中，能够特异性识别并阻断ASFV P72抗体的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.45030的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验和WB试验，鉴定所得到的单克隆抗体特异性识别P72蛋白构象表位，阻断ELISA试验结果表明，该单克隆抗体可以竞争性阻断猪血清中ASFV抗体与P72蛋白结合。本发明以偶联HRP单克隆抗体为竞争抗体，建立了一种阻断ELISA方法，该ELISA方法可以特异性检测ASFV感染的猪血清中抗体水平，操作简便，特异性好，敏感性高。本发明为ASFV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。
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公开(公告)号：CN113801854A
公开(公告)日：2021-12-17
申请号：CN202110995235.9
申请日：2021-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了分泌欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(European type Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,EU‑type PRRSV)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其应用，还公开了由该杂交瘤细胞系分泌的抗欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的特异性单克隆抗体及竞争ELISA方法的建立。该杂交瘤细胞系命名为EU1，其微生物保藏号是：CGMCC NO.23019。本发明的杂交瘤细胞系能够稳定分泌特异性识别EU‑type PRRSV的单克隆抗体，可用于特异性针对EU‑type PRRSV的竞争ELISA方法的建立。本发明的EU1杂交瘤细胞系及其分泌的单克隆抗体可以用于制备竞争法抗体诊断试剂盒，基于EU1建立的抗体鉴别诊断试剂盒可以区分EU‑type PRRSV和其它类型PRRSV的感染。
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公开(公告)号：CN111057145B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT‑PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc‑145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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