公开(公告)号：CN117286184A

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202311276709.X

申请日：2023-10-06

Applicant: 东南大学

Inventor： 朱丽娟 ,  石胡江 ,  王玉叶 ,  王洪梅

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/89 ,  A01K67/027 ,  A61K49/00 ,  C12N15/55

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Rasd1基因条件性敲除小鼠模型、构建方法及应用。构建方法包括以下步骤：基于CRISPR‑Cas9系统设计并构建靶向Rasd1基因的gRNA；根据gRNA序列设计2个携带Rasd1基因两侧靶位点同源区域及同向loxp位点的Donor载体；将gRNA和Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后与Donor载体一起通过显微注射直接注射到背景小鼠的受精卵中，随后移植至假孕小鼠，获得F0代小鼠，对F0代小鼠进行PCR鉴定获得阳性F0代小鼠；将F0代小鼠与背景小鼠配繁获得F1代小鼠，对F1代小鼠进行PCR鉴定获得阳性F1代小鼠；将F1代阳性小鼠与组织特异性Cre小鼠进行交配繁殖或者在F1代阳性小鼠的不同脑区注射特异启动子Cre病毒即可得到条件性敲除Rasd1小鼠模型。