公开(公告)号：CN117737123A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202311276712.1

申请日：2023-10-06

Applicant: 东南大学

Inventor： 朱丽娟 ,  石胡江 ,  王洪梅 ,  李娜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/89 ,  C12N15/90 ,  A01K67/0278 ,  A61K49/00

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Rasd1基因定点敲入2A‑Cre模型小鼠、构建方法及其应用。所述构建方法包括：确定小鼠Rasd1基因Exon 2中适合插入的位点为site1；针对Rasd1基因site1设计构建gRNA序列以及构建2A‑Cre‑IRES‑EGFP序列的Donor载体；将gRNA和Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后与Donor载体一起通过显微注射直接注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，经长片段PCR鉴定，获得同源重组的F0代小鼠；将同源重组的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得阳性F1代小鼠，对阳性F1代小鼠进行PCR鉴定即可获得Rasd1基因定点敲入2A‑Cre的小鼠模型。基于本发明得到的小鼠模型进而为研究神经系统疾病以及其他慢性应激相关病病理机制以及筛选相应治疗方法和药物提供有效的研究模型。

公开(公告)号：CN117286184A

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202311276709.X

申请日：2023-10-06

Applicant: 东南大学

Inventor： 朱丽娟 ,  石胡江 ,  王玉叶 ,  王洪梅

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/89 ,  A01K67/027 ,  A61K49/00 ,  C12N15/55

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Rasd1基因条件性敲除小鼠模型、构建方法及应用。构建方法包括以下步骤：基于CRISPR‑Cas9系统设计并构建靶向Rasd1基因的gRNA；根据gRNA序列设计2个携带Rasd1基因两侧靶位点同源区域及同向loxp位点的Donor载体；将gRNA和Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后与Donor载体一起通过显微注射直接注射到背景小鼠的受精卵中，随后移植至假孕小鼠，获得F0代小鼠，对F0代小鼠进行PCR鉴定获得阳性F0代小鼠；将F0代小鼠与背景小鼠配繁获得F1代小鼠，对F1代小鼠进行PCR鉴定获得阳性F1代小鼠；将F1代阳性小鼠与组织特异性Cre小鼠进行交配繁殖或者在F1代阳性小鼠的不同脑区注射特异启动子Cre病毒即可得到条件性敲除Rasd1小鼠模型。