一种基于荧光淬灭的核酸测序方法

    公开(公告)号:CN101168773A

    公开(公告)日:2008-04-30

    申请号:CN200710133930.4

    申请日:2007-10-16

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 一种基于荧光淬灭的核酸测序方法为:1)制备测序模板:把待测序的核酸片段,这里的核酸片段包括脱氧核糖核酸、核糖核酸或它们的核酸序列扩增产物、克隆产物,并将产物固定到载体上,2)在片延伸:用反应缓冲液、聚合酶以及荧光标记的dNTP混合液进行延伸,3)荧光淬灭:运用荧光淬灭剂,使荧光淬灭,4)在片延伸:用反应缓冲液、聚合酶以及荧光标记的dNTP混合液进行延伸,5)图象识别:对得到的延伸图象用Matlab进行特征点提取,清除噪声点处理实现对芯片的分析或者其他商业化的软件直接处理图像。本发明结合了核酸微阵列芯片技术,能高通量、快速、低成本对核酸进行大规模测序。

    一种基于荧光淬灭的核酸测序方法

    公开(公告)号:CN101168773B

    公开(公告)日:2010-06-02

    申请号:CN200710133930.4

    申请日:2007-10-16

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 一种基于荧光淬灭的核酸测序方法为:1)制备测序模板:把待测序的核酸片段,这里的核酸片段包括脱氧核糖核酸、核糖核酸或它们的核酸序列扩增产物、克隆产物,并将产物固定到载体上,2)在片延伸:用反应缓冲液、聚合酶以及荧光标记的dNTP混合液进行延伸,3)荧光淬灭:运用荧光淬灭剂,使荧光淬灭,4)在片延伸:用反应缓冲液、聚合酶以及荧光标记的dNTP混合液进行延伸,5)图象识别:对得到的延伸图象用Matlab进行特征点提取,清除噪声点处理实现对芯片的分析或者其他商业化的软件直接处理图像。本发明结合了核酸微阵列芯片技术,能高通量、快速、低成本对核酸进行大规模测序。

    一种用于核酸测序的微流体基因芯片

    公开(公告)号:CN101948741B

    公开(公告)日:2014-02-05

    申请号:CN201010288225.3

    申请日:2010-09-21

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 用于核酸测序的微流体基因芯片是一种用于核酸测序、基因捕获、基因筛选等领域的生物芯片。该芯片由多个微流体反应通道组成,通道表面具有微小颗粒6构成的DNA测序文库。微流体基因芯片由两层基板紧密结合在一起而形成,中间有微结构,组成通道式的流体反应池3,以及流体输入和输出孔4,下层基板为透明材料5,在与微流体反应池相对的下层材料表面有各种微小固体颗粒6,通过化学键与下层透明基底相连接。微小固体颗粒上固定有大量的核酸分子。经过微流体通道中的生化反应,可用光学检测手段来检测微小颗粒上的核酸分子的序列。

    一种用于核酸测序的微流体基因芯片

    公开(公告)号:CN101948741A

    公开(公告)日:2011-01-19

    申请号:CN201010288225.3

    申请日:2010-09-21

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 用于核酸测序的微流体基因芯片是一种用于核酸测序、基因捕获、基因筛选等领域的生物芯片。该芯片由多个微流体反应通道组成,通道表面具有微小颗粒6构成的DNA测序文库。微流体基因芯片由两层基板紧密结合在一起而形成,中间有微结构,组成通道式的流体反应池3,以及流体输入和输出孔4,下层基板为透明材料5,在与微流体反应池相对的下层材料表面有各种微小固体颗粒6,通过化学键与下层透明基底相连接。微小固体颗粒上固定有大量的核酸分子。经过微流体通道中的生化反应,可用光学检测手段来检测微小颗粒上的核酸分子的序列。

    循环杂交延伸DNA测序方法

    公开(公告)号:CN100552041C

    公开(公告)日:2009-10-21

    申请号:CN200710019412.X

    申请日:2007-01-22

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 循环杂交延伸DNA测序方法是一种实现了延伸标记物的清除方法,涉及一种循环杂交-延伸DNA测序方法,其步骤为:步骤1)当测序引物与固定的未知DNA模板杂交后,通过在测序引物上每次延伸一个标记单体、并检测后来确定不同位置的未知DNA模板在该次延伸中的碱基信息;步骤2)将延伸标记单体的测序引物从DNA模板中变性分离,并重新将测序引物与DNA模板杂交,用未标记的单体的延伸至已经确定的碱基序列,然后改用标记的单体延伸继续测序,该方法实现了延伸标记物的清除方法,每次杂交测序引物只延伸测定一小段的序列,错误延伸的效应不严重,重新杂交后的延伸按照流行的分子生物学方法进行,能够始终维持DNA模板和测序引物的量重新杂交后的延伸按照流行的分子生物学方法进行,没有标记物量的累积效应,能够始终维持DNA模板和测序引物的量。

    循环杂交延伸DNA测序方法

    公开(公告)号:CN101003840A

    公开(公告)日:2007-07-25

    申请号:CN200710019412.X

    申请日:2007-01-22

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 循环杂交延伸DNA测序方法是一种实现了延伸标记物的清除方法,涉及一种循环杂交-延伸DNA测序方法,其步骤为:步骤1)当测序引物与固定的未知DNA模板杂交后,通过在测序引物上每次延伸一个标记单体、并检测后来确定不同位置的未知DNA模板在该次延伸中的碱基信息;步骤2)将延伸标记单体的测序引物从DNA模板中变性分离,并重新将测序引物与DNA模板杂交,用未标记的单体的延伸至已经确定的碱基序列,然后改用标记的单体延伸继续测序,该方法实现了延伸标记物的清除方法,每次杂交测序引物只延伸测定一小段的序列,错误延伸的效应不严重,重新杂交后的延伸按照流行的分子生物学方法进行,能够始终维持DNA模板和测序引物的量重新杂交后的延伸按照流行的分子生物学方法进行,没有标记物量的累积效应,能够始终维持DNA模板和测序引物的量。

    基于微阵列芯片的核酸测序方法

    公开(公告)号:CN1932033A

    公开(公告)日:2007-03-21

    申请号:CN200610096372.4

    申请日:2006-09-22

    Applicant: 东南大学

    Abstract: 基于核酸微阵列芯片的核酸测序方法是一种进行特定物种的基因组测序、基因转录和表达谱的检测、以及各种基因组DNA修饰谱的检测,将不同待测序的DNA片段分别固定到一块固体基片上,形成核酸微阵列,并使每个DNA片段都含有相同的公共序列作为测序引物的互补序列。将公共测序引物与芯片杂交后,利用Sanger末端终止法,通过微流控装置将某一种核苷酸混合溶液按一定比例的荧光标记ddNTP和dNTP,注入到上述的DNA片段微阵列芯片上进行在片碱基终止反应,每延伸终止一次后立即扫描一次荧光信号,得到芯片上不同样品点碱基延伸信息。最后利用图像处理软件将每张测序图进行叠加,得出每个样品点上固定的核酸片段完整的序列信息。

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