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公开(公告)号：CN119530134A
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202510103996.7
申请日：2025-01-23
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪肠类器官与淋巴细胞共培养体系及其构建方法和应用，属于病毒培养技术领域。所述的共培养体系是由猪回肠类器官与猪小肠上皮内淋巴细胞通过共培养后得到。使用所述的共培养体系在不添加胰酶的情况下，PEDV仍然可以感染类器官，且使用该共培养体系分离培养PEDV野毒株，在盲传第四代时可观察到类器官病变，而此时其在Vero细胞上没出现病变。RT‑PCR鉴定发现，PEDV野毒株在该共培养体系上连续传代五代均可扩增出条带，而无论是否添加胰酶，PEDV在Vero细胞上连续盲传五代均没有扩增出条带。本发明的提出对了解PEDV发病机制及开发预防PEDV感染的新药物以及疗法具有重要意义。
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公开(公告)号：CN118460584A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410433277.7
申请日：2024-04-10
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9系统的营养缺陷型乳酸菌基因编辑系统及应用，所述的营养缺陷型乳酸菌基因编辑系统包括以pLCNICK为骨架构建得到的基因编辑质粒，所述的基因编辑质粒中含有识别特异性靶序列的sgRNAs以及所要插入或敲除位点的上下游同源序列，其连接顺序为上游同源序列‑下游同源序列‑sgRNAs。所述的系统用于外源基因插入时，还包括在上、下游同源序列中间插入外源基因序列。本发明利用CRISPR‑Cas9系统和营养缺陷型选择标记建立了一套在乳酸菌基因组任意位点进行插入、缺失或突变操作的基因组编辑系统，实现了对不同乳酸菌菌株的不同基因位点高效、精确敲除及插入，实现了乳酸菌系统复制的人工控制。
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公开(公告)号：CN117070432A
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202310884511.3
申请日：2023-07-18
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种融合表达猪源树突状细胞靶向肽和PEDV中和抗原表位的重组乳酸杆菌及其应用。所述的重组乳酸杆菌中含有融合表达猪源树突状细胞靶向肽KC1和猪流行性腹泻病毒(PEDV)中和抗原表位COE的质粒，其中，所述的猪源树突状细胞靶向肽KC1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明从益生菌乳酸菌将免疫原性抗原特异性靶向树突细胞可以诱导抗原的强大免疫反应这一特点出发，研发出一种融合表达猪源树突状细胞靶向肽KC1和PEDV中和抗原表位COE的重组乳酸杆菌疫苗。本发明的提出为靶向疫苗的研究提供重要的物质基础和技术手段，对猪的新型靶向性疫苗的研制与开发具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114518447A
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202210067681.8
申请日：2022-01-20
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/52 , G01N33/543 , G01N33/558 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种检测牛细小病毒的信号增强型胶体金免疫层析试纸条及其应用。所述的试纸条按照连接顺序依次包括样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水垫及位于下方的作为组装平台使用的PVC底板，所述的胶体金垫上吸附有胶体金和辣根过氧化物酶共同标记的抗牛细小病毒单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上具有兔抗牛细小病毒多克隆抗体包被的检测线，以及山羊抗鼠IgG包被的质控线，样品垫提供了待测样品加入的位置；其中，所述的抗牛细小病毒单克隆抗体由分泌牛细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株分泌产生，所述的分泌牛细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为8C10，菌种保藏编号为：CGMCC NO.23880。本发明的提出为牛细小病毒的检测提供了有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN118127119A
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202410355708.2
申请日：2024-03-26
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了猪PRDX4蛋白在制备抑制口蹄疫病毒感染和复制的生物制剂中的应用，属于基因工程技术领域。本发明发现过表达宿主PRDX4基因，能够抑制口蹄疫病毒的感染和复制，即PRDX4可作为靶点用于筛选抑制口蹄疫病毒感染和复制的试剂。本发明还提供了一种稳定过表达PRDX4的BHK21细胞系，可用于制备无口蹄疫病毒感染的细胞或动物模型，同时提供了相应的制备方法：构建过表达PRDX4的pLPCX‑HA‑PRDX4质粒，与pVSVG和pCGP包装载体构成三质粒表达系统，共转染293T细胞，收集慢病毒转染BHK21细胞，获得稳定过表达PRDX4基因的BHK21细胞系，在临床、实验室研究上具有广阔的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118291576A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410355701.0
申请日：2024-03-26
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了猪hnRNPD蛋白在制备抑制口蹄疫病毒感染和复制的生物制剂中的应用，属于基因工程技术领域。本发明发现过表达宿主hnRNPD基因，能够抑制口蹄疫病毒的感染和复制，即hnRNPD可作为靶点用于筛选抑制口蹄疫病毒感染和复制的试剂。本发明还提供了一种稳定过表达hnRNPD的BHK21细胞系，可用于制备无口蹄疫病毒感染的细胞或动物模型，同时提供了相应的制备方法：构建过表达hnRNPD的pLPCX‑HA‑hnRNPD质粒，与pVSVG和pCGP包装载体构成三质粒表达系统，共转染293T细胞，收集慢病毒转染BHK21细胞，获得稳定过表达hnRNPD基因的BHK21细胞系，在临床、实验室研究上具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN117451988A
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202310994974.5
申请日：2023-08-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/577 , G01N33/558 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种牛轮状病毒信号增强型胶体金免疫层析试纸条及其应用。所述的试纸条包括从左到右依次连接的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，还包括位于下方的PVC板，硝酸纤维素膜上具有山羊抗鼠IgG喷涂的质控线，以及兔抗牛轮状病毒多克隆抗体喷涂的检测线，胶体金垫上涂覆有辣根过氧化物酶标记的鼠抗牛轮状病毒的单克隆抗体BoRV‑3D4与胶体金颗粒的缀合物。本发明通过将偶联标记HRP的抗体标记在胶体金的表面，利用TMB显色液增强显色，利用酶信号放大检测效果，并通过对试纸条胶体金垫、样品垫处理液、检测线抗体浓度等条件进行摸索，优化试纸条反应条件，为牛轮状病毒诊断提供了一种简便、快速、灵敏的现地检测方法。
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公开(公告)号：CN116789850A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202310596122.0
申请日：2023-05-24
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种靶向DCs的禽腺病毒重组蛋白及其在制备禽腺病毒亚单位疫苗中的应用，属于生物技术领域。所述的靶向DCs的禽腺病毒重组蛋白是将禽腺病毒fiber蛋白与鸡骨髓源树突状细胞的靶向肽SP序列融合后，利用柔性Linker将融合靶向肽序列的fiber蛋白序列插入鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白B亚单位的N末端和C末端之间构建得到的。其中，禽腺病毒fiber蛋白为禽腺病毒血清4型、8b型或11型fiber蛋白或是含有上述至少两种血清型禽腺病毒fiber蛋白关键抗原表位的融合蛋白。优选的，所述的靶向DCs的禽腺病毒重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑4任一所示。本发明的提出为预防禽腺病毒特别是多血清型禽腺病毒混合感染提供了有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN116555490A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310377490.6
申请日：2023-04-10
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒及猪德尔塔冠状病毒双重重组酶聚合酶扩增快速检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有分别用于扩增猪流行性腹泻病毒及猪德尔塔冠状病毒的引物。本发明建立了一种双重RPA法以实现同时检测PEDV和PDCoV。双重RPA法体系优化结果显示，在36℃，反应时间为21min且PDCoV:PEDV引物体积为1:4的条件下，对两种病毒检测的灵敏度可达到104copies/μL，且特异性强，无交叉反应现象。94份临床样品的检测结果显示，双重RPA法与RT‑qPCR法和RT‑PCR法的符合率可达80％以上。相比较于RT‑PCR，具有更短的检测时间以及更高的敏感性，对仪器、场地和检测环境的要求更低，为今后PEDV以及PDCoV的预防及快速检测提供了更有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN113174354A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110416205.8
申请日：2021-04-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/74 , C12N1/04 , A23K10/18 , A61K35/747 , A61K9/50 , A61P37/04 , A61P43/00 , C12R1/225
Abstract: 本发明提供了一种重组罗伊氏乳酸杆菌及其制备方法、制剂和应用，涉及微生物的技术领域。具体地，本发明提供了一种能够表达和分泌乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳酸杆菌，采用喷雾干燥法制备的微胶囊菌剂及其在制备动物饲料添加剂、预防和/或治疗动物疾病、提高动物生长性能和免疫力中的应用。重组罗伊氏乳酸杆菌及其制剂，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌，沙门氏菌等耐药菌都有杀菌作用；同时，对猪大肠杆菌病、猪传染性胃肠炎、猪副伤寒等仔猪肠道疾病有一定的抵抗作用，还能提高断乳仔猪的免疫机能并改善其肠道微生态环境，促进断乳仔猪健康生长，可达到良好的抗生素替代效果，具有极高的实用价值和经济价值。
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