公开(公告)号：CN105524932A

公开(公告)日：2016-04-27

申请号：CN201510859994.7

申请日：2015-11-30

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 杨志刚 ,  魏帮鸿 ,  施秋燕 ,  姚琴琴 ,  杨青 ,  刘青 ,  成永旭 ,  王健懿 ,  杨筱珍

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/63 ,  C12N15/10

Abstract: 中华绒螯蟹的delta6去饱和酶基因及其克隆方法，该方法包括步骤：(1)根据Genebank中华绒螯蟹和菁夜蛾的delta6去饱和酶基因进行对比，获得保守序列，设计保守区序列引物FAD6-F1(+)/FAD6-R1(-)，以中华绒螯蟹肝胰腺总RNA反转录合成的cDNA第一链为模板，进行PCR反应，获得delta6去饱和酶基因片段核心片段，将核心片段克隆到载体上并测序；(2)根据获得的delta6去饱和酶基因核心片段设计5’-和3’-RACE引物，FAD6-5’(-)和FAD6-3’(+)，以中华绒螯蟹肝胰腺总RNA反转录合成的5’-cDNA和3’-cDNA为模板，进行RACE反应，获得5’和3’末端片段，将得到的该片段分别连接至载体后克隆并测序；(3)将5’和3’末端片段分别与获得的delta6去饱和酶基因核心片段进行拼接得到delta6去饱和酶基因全长序列。

公开(公告)号：CN105331621B

公开(公告)日：2019-01-29

申请号：CN201510790826.7

申请日：2015-11-17

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 施秋燕 ,  杨志刚 ,  杨青 ,  魏帮鸿 ,  刘青 ,  成永旭 ,  王健懿 ,  杨筱珍

IPC: C12N15/52 ,  C12N9/00 ,  C12N15/63 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12R1/865 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及中华绒螯蟹Elovl6基因和其克隆方法，该方法包括：(1)对不同物种的Elovl6氨基酸序列进行比对，根据对应的保守区域设计引物Elovl6‑F1/Elovl6‑R1，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成cDNA第一链，以此为模板，进行PCR反应，获得的核心片段克隆到载体上并测序；(2)根据上述核心片段，分别设计3’‑Elovl6 RACE上游引物和5’‑Elovl6 RACE下游引物，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成3’‑cDNA和5’‑cDNA第一链，以此为模板，进行3’和5’末端侧翼片段RACE，将得到的3’和5’末端侧翼片段分别与载体连接，克隆并测序；(3)将得到的末端侧翼片段与核心片段进行拼接，获得中华绒螯蟹Elovl6基因的全长序列。

公开(公告)号：CN105331621A

公开(公告)日：2016-02-17

申请号：CN201510790826.7

申请日：2015-11-17

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 施秋燕 ,  杨志刚 ,  杨青 ,  魏帮鸿 ,  刘青 ,  成永旭 ,  王健懿 ,  杨筱珍

IPC: C12N15/52 ,  C12N9/00 ,  C12N15/63 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12R1/865 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及中华绒螯蟹Elovl6基因和其克隆方法，该方法包括：(1)对不同物种的Elovl6氨基酸序列进行比对，根据对应的保守区域设计引物Elovl6-F1/Elovl6-R1，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成cDNA第一链，以此为模板，进行PCR反应，获得的核心片段克隆到载体上并测序；(2)根据上述核心片段，分别设计3’-Elovl6 RACE上游引物和5’-Elovl6 RACE下游引物，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成3’-cDNA和5’-cDNA第一链，以此为模板，进行3’和5’末端侧翼片段RACE，将得到的3’和5’末端侧翼片段分别与载体连接，克隆并测序；(3)将得到的末端侧翼片段与核心片段进行拼接，获得中华绒螯蟹Elovl6基因的全长序列。