一种运用飞秒激光改善类器官体外3D培养微环境的方法

    公开(公告)号:CN111304152B

    公开(公告)日:2024-07-05

    申请号:CN202010153395.4

    申请日:2020-03-06

    Inventor: 秦环龙 蔚青 李曼

    Abstract: 本发明涉及一种运用飞秒激光改善类器官体外3D培养微环境的方法,包括如下步骤,S1:将动物源性类器官于载有基质胶的培养皿内培养3‑5天;S2:将S1培养皿固定于三维精密工作台上,并使飞秒激光的光束经过衰减片、偏振片及透镜,将焦点聚焦于基质胶内;通过控制三维精密工作台运动使飞秒激光束焦点在基质胶内部扫描构建三维多孔道结构;其中,透镜为20X或40X空气显微镜头;飞秒激光的光束不接触动物源性类器官。本发明运用飞秒激光改善类器官体外3D培养微环境的方法,在基质胶内部、类器官周围建立三维多孔道结构,改善类器官生长的微环境,通过三维多孔道网络模拟毛细血管,促进营养物质交换过程,有助于类器官的体外生长。

    一种基于肠道类器官筛选药物的方法

    公开(公告)号:CN111534564A

    公开(公告)日:2020-08-14

    申请号:CN202010307831.9

    申请日:2020-04-17

    Inventor: 秦环龙 蔚青 李曼

    Abstract: 本发明公开了一种基于肠道类器官筛选药物的方法,包括如下步骤:用手术切除的新鲜结直肠癌组织或肠镜活检标本构建肠道类器官;将培养好的肠道类器官消化为单细胞,然后将单细胞按照一定数量铺于96孔酶标板中;将待筛选的药物加入孔中,放入培养箱中培养5天;培养完成后,每孔加入CellTiter-Glo 3D细胞活力检测试剂10min后,置于OrionⅡ仪器读值,评估细胞活力。本发明提供的一种基于肠道类器官筛选药物的方法采用肠道类器官模型作为疗效评估的手段,通过术中或肠镜活检标本构建肠道类器官,体外应用抗肿瘤药物及靶向药物等处理肠道类器官,效果数据接近真实效果,可为个体化治疗提供依据。

    一种结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法

    公开(公告)号:CN112143699A

    公开(公告)日:2020-12-29

    申请号:CN202010956473.4

    申请日:2020-09-11

    Inventor: 秦环龙 蔚青 李曼

    Abstract: 本发明提供了一种结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法,该方法包括如下步骤:用新鲜结直肠癌组织构建结直肠癌类器官;获取外周血,然后进行红细胞裂解并采用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞;富集CD3+T细胞;将类器官消化为单细胞,然后与培养之后的CD3+T细胞按照1:10‑30的比例进行共培养,依据上述步骤构建该结直肠癌患者来源类器官免疫微环境。本发明提供的结直肠癌类器官免疫微环境重构的方法采用来源于同一个体的新鲜结直肠癌组织和外周血来源的CD3+T细胞共培养获得类器官免疫微环境,从细胞形态和ATP值显示免疫细胞对CRC患者类器官有明显杀伤作用,为临床自体T细胞回输的免疫治疗提供体外实验依据。

    一种结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型及其构建方法

    公开(公告)号:CN113106065A

    公开(公告)日:2021-07-13

    申请号:CN202110287770.9

    申请日:2021-03-17

    Inventor: 秦环龙 蔚青 李曼

    Abstract: 本发明涉及一种结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型的构建方法,步骤包括:分别收集结直肠癌类器官与肝脏类器官,离心后弃去上清,并尽量吸去基质胶;分别加入消化液,于室温消化完成后,离心并弃去上清,进行细胞计数;按1:1的细胞数目比例将所述结直肠癌类器官与所述肝脏类器官混合,采用基质胶重悬后,滴加至已预热的24孔板上,凝胶在遇热后迅速转变为果冻状;将所述24孔板置于培养箱内孵育,完成后每孔加入结直肠癌类器官培养基以及肝脏类器官培养基,再置于培养箱内培养。本发明的结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型可在体外模拟体内3D生长环境,能够更加真实反映机体功能,从而研究肠癌肝转移的病理过程及发生机制。

    一种运用飞秒激光改善类器官体外3D培养微环境的方法

    公开(公告)号:CN111304152A

    公开(公告)日:2020-06-19

    申请号:CN202010153395.4

    申请日:2020-03-06

    Inventor: 秦环龙 蔚青 李曼

    Abstract: 本发明涉及一种运用飞秒激光改善类器官体外3D培养微环境的方法,包括如下步骤,S1:将动物源性类器官于载有基质胶的培养皿内培养3-5天;S2:将S1培养皿固定于三维精密工作台上,并使飞秒激光的光束经过衰减片、偏振片及透镜,将焦点聚焦于基质胶内;通过控制三维精密工作台运动使飞秒激光束焦点在基质胶内部扫描构建三维多孔道结构;其中,透镜为20X或40X空气显微镜头;飞秒激光的光束不接触动物源性类器官。本发明运用飞秒激光改善类器官体外3D培养微环境的方法,在基质胶内部、类器官周围建立三维多孔道结构,改善类器官生长的微环境,通过三维多孔道网络模拟毛细血管,促进营养物质交换过程,有助于类器官的体外生长。

    一种结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型及其构建方法

    公开(公告)号:CN113106065B

    公开(公告)日:2024-02-27

    申请号:CN202110287770.9

    申请日:2021-03-17

    Inventor: 秦环龙 蔚青 李曼

    Abstract: 本发明涉及一种结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型的构建方法,步骤包括:分别收集结直肠癌类器官与肝脏类器官,离心后弃去上清,并尽量吸去基质胶;分别加入消化液,于室温消化完成后,离心并弃去上清,进行细胞计数;按1:1的细胞数目比例将所述结直肠癌类器官与所述肝脏类器官混合,采用基质胶重悬后,滴加至已预热的24孔板上,凝胶在遇热后迅速转变为果冻状;将所述24孔板置于培养箱内孵育,完成后每孔加入结直肠癌类器官培养基以及肝脏类器官培养基,再置于培养箱内培养。本发明的结直肠癌类器官与肝脏类器官共培养模型可在体外模拟体内3D生长环境,能够更加真实反映机体功能,从而研究肠癌肝转移的病理过程及发生机制。

Patent Agency Ranking