公开(公告)号：CN103060421A

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201310023764.8

申请日：2013-01-22

Applicant: 上海市内分泌代谢病研究所

Inventor： 宁光 ,  邓玉杰 ,  杨颖 ,  张志国

IPC: C12Q1/02 ,  C12N15/867 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种脂肪细胞中自噬的监测方法，成熟脂肪细胞由于其特殊的结构，胞内充满大量脂滴，使细胞器和核向周边移位，电镜下难以看到典型的自噬体。但本发明经过多次实验，不断改进实验条件，终于成功的在成熟的3T3-L1脂肪细胞内观察到处于各个自噬阶段的自噬结构。此外，由于成熟脂肪具有不易转染的特点，普通的质粒转染很难达到预期的效果。因此，本发明利用GFP-LC3慢病毒方法感染3T3-L1脂肪细胞，荧光显微镜下观察感染效率达到80%以上。在营养饥饿情况下，本发明成功观察到GFP-LC3点状聚集现象。成熟脂肪细胞内自噬监测方法的建立为我们以后研究自噬与脂代谢的关系奠定了基础。

公开(公告)号：CN103060421B

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201310023764.8

申请日：2013-01-22

Applicant: 上海市内分泌代谢病研究所

Inventor： 宁光 ,  邓玉杰 ,  杨颖 ,  张志国

IPC: C12Q1/02 ,  C12N15/867 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种脂肪细胞中自噬的监测方法，成熟脂肪细胞由于其特殊的结构，胞内充满大量脂滴，使细胞器和核向周边移位，电镜下难以看到典型的自噬体。但本发明经过多次实验，不断改进实验条件，终于成功的在成熟的3T3-L1脂肪细胞内观察到处于各个自噬阶段的自噬结构。此外，由于成熟脂肪具有不易转染的特点，普通的质粒转染很难达到预期的效果。因此，本发明利用GFP-LC3慢病毒方法感染3T3-L1脂肪细胞，荧光显微镜下观察感染效率达到80%以上。在营养饥饿情况下，本发明成功观察到GFP-LC3点状聚集现象。成熟脂肪细胞内自噬监测方法的建立为以后研究自噬与脂代谢的关系奠定了基础。

公开(公告)号：CN103105326A

公开(公告)日：2013-05-15

申请号：CN201210587944.4

申请日：2012-12-30

Applicant: 上海市内分泌代谢病研究所

Inventor： 宁光 ,  谢晓雁 ,  杨颖 ,  崔斌 ,  郭婷 ,  朱巍

IPC: G01N1/30 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种Th细胞表面及胞内染色的方法及其应用，其步骤为：刺激细胞→阻断细胞膜表面Fc受体→细胞膜表面抗原染色→细胞固定→细胞透膜→胞内或核内抗原染色→流式细胞分析等步骤，可以对Th细胞表面及胞内染色，并获得较好的实验效果。可应用于测试Th1、Th2、Th17细胞占CD4+细胞的比例。