pGreenMax1真核表达载体及其制备方法

    公开(公告)号:CN102242143A

    公开(公告)日:2011-11-16

    申请号:CN201110099371.6

    申请日:2011-04-20

    Abstract: 本发明涉及一种分子生物技术领域的pGreen Max1真核表达载体及其制备方法。由Mex、IRES-EGFP片段和真核表达载体重组获得序列1,序列1共计7976bp,其中在第1769bp-2415bp之间插入了含有647bp的Mex片段,在第3120bp-4428bp之间插入了含有1309bp的IRES-EGFP序列;制备方法包括:设计引物从质粒中通过PCR的方法克隆得到Mex,并将PCR产物经过SmaI位点定向插入到表达载体中,并经过BamHI和NotI双酶切将IRES-EGFP插入到载体中,构建重组的pGreenMax真核表达载体。本发明载体作为在真核细胞中获取目的蛋白或抗体的应用,并为高产哺乳动物细胞株的筛选提供蛋白表达及筛选的标记。

    布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法

    公开(公告)号:CN101633915B

    公开(公告)日:2011-06-08

    申请号:CN200910056686.5

    申请日:2009-08-20

    Abstract: 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法,具体步骤如下:分别设计引物,扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因;将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中,构建pET21a(+)-PheRSα及pET21a(+)-PheRSβ表达载体;将α亚基的操纵子亚克隆到pET21a(+)-PheRSβ中,形成重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ;将重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ转化大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中,IPTG诱导表达;收集裂解后的菌液上清,纯化蛋白,得布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶。本发明构建布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶(PheRS)的重组质粒,表达纯化出布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶蛋白,为抗寄生虫药物的筛选奠定了基础。

    布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法

    公开(公告)号:CN101935638A

    公开(公告)日:2011-01-05

    申请号:CN200910048246.5

    申请日:2009-03-26

    Abstract: 一种生物技术领域的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法,步骤包括:设计特异引物,扩增布氏锥虫全基因组;切胶回收,得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶基因;将步骤二得到的基因连接到克隆载体中,构建基因克隆质粒;将克隆质粒亚克隆进表达载体,鉴定,转化大肠杆菌,培养转化的大肠杆菌单克隆,诱导;纯化表达的融合蛋白,得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白。本发明所得的亮氨酰tRNA合成酶可以作为药物筛选的靶标,广泛的应用于药物筛选领域。

    pGreenMax1真核表达载体及其制备方法

    公开(公告)号:CN103305546B

    公开(公告)日:2014-08-27

    申请号:CN201310268113.5

    申请日:2011-04-20

    Abstract: 本发明涉及一种的是分子生物技术领域的pGreen Max1真核表达载体及其制备方法。由Mex、IRES-EGFP片段和真核表达载体重组获得序列1,序列1共计8003bp,其中在第1769bp-2415bp之间插入了含有647bp的Mex片段,在第3120bp-4428bp之间插入了含有1309bp的IRES-EGFP序列;制备方法包括:设计引物从质粒中通过PCR的方法克隆得到Mex,并将PCR产物经过SmaI位点定向插入到表达载体中,并经过BamHI和NotI双酶切将IRES-EGFP插入到载体中,构建重组的pGreen Max真核表达载体。本发明载体作为在真核细胞中获取目的蛋白或抗体的应用,并为高产哺乳动物细胞株的筛选提供蛋白表达及筛选的标记。

    pGreenMax1真核表达载体及其制备方法

    公开(公告)号:CN103305546A

    公开(公告)日:2013-09-18

    申请号:CN201310268113.5

    申请日:2011-04-20

    Abstract: 本发明涉及一种的是分子生物技术领域的pGreen Max1真核表达载体及其制备方法。由Mex、IRES-EGFP片段和真核表达载体重组获得序列1,序列1共计7976bp,其中在第1769bp-2415bp之间插入了含有647bp的Mex片段,在第3120bp-4428bp之间插入了含有1309bp的IRES-EGFP序列;制备方法包括:设计引物从质粒中通过PCR的方法克隆得到Mex,并将PCR产物经过SmaI位点定向插入到表达载体中,并经过BamHI和NotI双酶切将IRES-EGFP插入到载体中,构建重组的pGreen Max真核表达载体。本发明载体作为在真核细胞中获取目的蛋白或抗体的应用,并为高产哺乳动物细胞株的筛选提供蛋白表达及筛选的标记。

Patent Agency Ranking