公开(公告)号：CN101633915A

公开(公告)日：2010-01-27

申请号：CN200910056686.5

申请日：2009-08-20

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 姚璎 ,  杲光伟 ,  李大伟

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法，具体步骤如下：分别设计引物，扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因；将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中，构建pET21a(+)-PheRSα及pET21a(+)-PheRSβ表达载体；将α亚基的操纵子亚克隆到pET21a(+)-PheRSβ中，形成重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ；将重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ转化大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中，IPTG诱导表达；收集裂解后的菌液上清，纯化蛋白，得布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶。本发明构建布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶(PheRS)的重组质粒，表达纯化出布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶蛋白，为抗寄生虫药物的筛选奠定了基础。

公开(公告)号：CN101633915B

公开(公告)日：2011-06-08

申请号：CN200910056686.5

申请日：2009-08-20

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 姚璎 ,  杲光伟 ,  李大伟

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法，具体步骤如下：分别设计引物，扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因；将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中，构建pET21a(+)-PheRSα及pET21a(+)-PheRSβ表达载体；将α亚基的操纵子亚克隆到pET21a(+)-PheRSβ中，形成重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ；将重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ转化大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中，IPTG诱导表达；收集裂解后的菌液上清，纯化蛋白，得布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶。本发明构建布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶(PheRS)的重组质粒，表达纯化出布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶蛋白，为抗寄生虫药物的筛选奠定了基础。

公开(公告)号：CN101935638A

公开(公告)日：2011-01-05

申请号：CN200910048246.5

申请日：2009-03-26

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 李大伟 ,  姚璎 ,  周虎臣

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 一种生物技术领域的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法，步骤包括：设计特异引物，扩增布氏锥虫全基因组；切胶回收，得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶基因；将步骤二得到的基因连接到克隆载体中，构建基因克隆质粒；将克隆质粒亚克隆进表达载体，鉴定，转化大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌单克隆，诱导；纯化表达的融合蛋白，得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白。本发明所得的亮氨酰tRNA合成酶可以作为药物筛选的靶标，广泛的应用于药物筛选领域。