一种检测以DAP12作为胞内信号结构CAR-T细胞的方法及其试剂盒

    公开(公告)号:CN109182470A

    公开(公告)日:2019-01-11

    申请号:CN201811100676.2

    申请日:2018-09-20

    IPC分类号: C12Q1/6851 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种检测以DAP12作为胞内信号的CAR-T细胞的方法,采用SEQ ID NO:1所示的上游引物、SEQ ID NO:2所示的下游引物和SEQ ID NO:3所示的探针进行TaqMan实时荧光定量PCR检测。本发明方法为:使用基因组DNA提取试剂盒,提取CAR-T细胞基因组,建立快速定量检测体外培养或临床治疗后患者体内CAR-T细胞数。本发明公开的一种检测外周血中以DAP12作为胞内信号结构的CAR-T细胞的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法及相关试剂盒,可用于检测所有以DAP12作为胞内信号结构的CAR-T细胞。该方法可在2h内,检测出3.9×101-3.9×107copies/μl范围内的CAR-T细胞进行准确定量。本发明建立的检测方法,特异性强,定量准确,检测快速,使用范围广。

    一种慢病毒载体制备方法
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN118272443A

    公开(公告)日:2024-07-02

    申请号:CN202211708410.2

    申请日:2022-12-29

    发明人: 王恩秀 汪晨

    摘要: 本发明涉及CAR慢病毒载体系统及制备方法,属于生物技术领域。包括pELNS‑CAR质粒、2个包装质粒pRSV‑rev和pGAG‑Pol,包膜蛋白质粒pVSV‑G。将载体系统中的pELNS‑CAR质粒、2个包装质粒pRSV‑rev和pGAG‑Pol,包膜蛋白质粒pVSV‑G共同转染293T细胞后,即可获得慢病毒上清。本发明具有以下特点:1)成本低,以转染5个T150的细胞为例,推荐使用的脂质体2000体积为1350μl(270μl×5)价格约为2000元,而使用本方法的成本可降至50元,成本可大幅降低;2)转染效率高;3)病毒滴度高,可达到8.4×108TU/ml。

    一种增效且抵抗耗竭的嵌合抗原受体T细胞及其在制备治疗肿瘤药物中的用途

    公开(公告)号:CN113493525A

    公开(公告)日:2021-10-12

    申请号:CN202010263052.3

    申请日:2020-04-07

    发明人: 王恩秀 汪晨 陈颖

    摘要: 本发明公开一种增效且抵抗耗竭的嵌合抗原受体T细胞及其在制备治疗肿瘤药物中的用途,其包括:抗原结合结构域(scFv)和信号传导结构域;其中信号传导结构域包括第一传导结构域和第二传导结构域,第一传导结构域和第二传导结构域之间串联抗原结合结构域;所述第一传导结构域包括受体信号结构域和/或共刺激结构域;第二传导结构域包括跨膜结构域DAP12,所述跨膜结构域DAP12连接或不连接共刺激结构域和/或基本信号域。表达该嵌合抗原受体的T细胞,能够使得该嵌合抗原受体在T细胞中更加高效、稳定表达,以更好地发挥对靶细胞的杀伤作用,提高CAR‑T的持久性,耗竭标志物表达更低,具备更丰富的记忆型T细胞。