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    一种合成寡糖的成熟多肽
    1.
    发明公开
    一种合成寡糖的成熟多肽 审中-公开

    公开(公告)号：CN118056903A

    公开(公告)日：2024-05-21

    申请号：CN202211451076.7

    申请日：2022-11-20

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩 ,  牛康乐 ,  唐琪 ,  韩丽娟 ,  广濑芳彦

    IPC分类号： C12N9/38 ,  C12P19/26

    摘要： 本发明涉及一种成熟多肽和/或成熟多肽突变体，其氨基酸序列与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10和/或SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:12和/或SEQ ID NO:13和/或SEQ ID NO:14和/或SEQ ID NO:15和/或SEQ ID NO:16和/或SEQ ID NO:17和/或SEQ ID NO:18具有至少60％的序列一致性，其具有合成LNT和LNnT的能力。

    合成寡糖的成熟多肽序列及应用
    2.
    发明公开
    合成寡糖的成熟多肽序列及应用 有权

    公开(公告)号：CN118056901A

    公开(公告)日：2024-05-21

    申请号：CN202211449962.6

    申请日：2022-11-19

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩 ,  牛康乐 ,  唐琪

    IPC分类号： C12N9/10 ,  C12P19/00 ,  C12P19/18

    摘要： 本发明提供了一种成熟多肽序列及其突变体，包括氨基酸序列与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10具有至少60％，或至少70％、或至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％序列一致性的多肽。所述成熟多肽序列突变体，其具有较高催化合成LNT的能力。

    含有醇脱氢酶突变体基因的工程菌及其应用
    3.
    发明公开
    含有醇脱氢酶突变体基因的工程菌及其应用 审中-公开

    公开(公告)号：CN116875522A

    公开(公告)日：2023-10-13

    申请号：CN202310914824.9

    申请日：2023-07-25

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩 ,  李宾 ,  韩丽娟

    IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N9/04 ,  C12N15/75 ,  C12N15/81 ,  C12P19/02 ,  C12R1/125 ,  C12R1/865

    摘要： 本发明提供了含有醇脱氢酶突变体基因的工程菌及其应用。本发明技术领域涉及含有醇脱氢酶突变体的基因工程菌及其在合成稀有糖方面的应用。所述基因工程菌，由醇脱氢酶突变体基因构建入芽孢杆菌或酿酒酵母获得，所述醇脱氢酶突变体，选自如SEQ ID NO:1所示PDH酶的如下突变中的一种：D36A/I37R、D36G/I37R、D36R/I37R、D36H/I37R、D36K/I37R、D36I/I37R、D36F/I37R、A14T/D36A/I37R、或A14T/D36G/I37R，或如SEQ ID NO:2所示GDH醇脱氢酶如下突变：E42A。本发明所述基因工程菌，具有提高的合成塔格糖活性。

    重组酵母、构建方法和其在制备酪醇及衍生物中的应用
    5.
    发明授权
    重组酵母、构建方法和其在制备酪醇及衍生物中的应用 有权

    公开(公告)号：CN113388538B

    公开(公告)日：2023-05-05

    申请号：CN202110653988.1

    申请日：2020-01-07

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩 ,  郭伟 ,  侯少莉

    IPC分类号： C12N1/19 ,  C12P7/22 ,  C12R1/865 ,  C12R1/645

    摘要： 本发明涉及重组酵母、构建方法和其在制备酪醇及衍生物中的应用，所述重组酵母为将外源性的果糖‑6‑磷酸盐磷酸酮酶的表达基因导入经过改造的酵母细胞中构建获得，所述经过改造的酵母细胞为具有经4‑磷酸赤藓糖和磷酸烯醇式丙酮酸合成酪醇代谢途径的酵母细胞。本发明首次公开了在酵母中表达果糖‑6‑磷酸盐磷酸酮酶的过程中，果糖‑6‑磷酸在合成1,6‑二磷酸果糖的同时，被催化为赤藓糖‑4‑磷酸和乙酰磷酸，木酮糖‑5‑磷酸被催化为甘油醛‑3‑磷酸和乙酰磷酸，这改变了酵母中的碳代谢流量分布，增强酪醇生物合成重要中间物质的赤藓糖‑4‑磷酸的合成，优化了合成酪醇的代谢途径，提高酪醇及羟基酪醇等衍生物的产率。

    一种从红景天粉末中提取并纯化红景天苷的方法
    6.
    发明公开
    一种从红景天粉末中提取并纯化红景天苷的方法 审中-实审

    公开(公告)号：CN113897406A

    公开(公告)日：2022-01-07

    申请号：CN202111150297.6

    申请日：2021-09-29

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩 ,  姜福娇 ,  张飘飘

    IPC分类号： C12P19/44 ,  C07H15/18 ,  C07H1/08 ,  C12R1/865 ,  C12R1/645

    摘要： 本发明涉及一种从红景天粉末中提取并纯化红景天苷的方法，该方法包括：(1)预处理：将红景天粉末与磷酸溶液混合，热处理后，调节pH，加入复合酶，酶解后制得红景天粗提液；(2)酵母菌种子液制备；(3)酵母菌发酵得红景天发酵液；(4)分离纯化得红景天苷提纯液。按照本发明的方法酶解、发酵提取、提纯后，红景天苷的提取率达到了90.8％‑92.3％，纯度也由2.8％提高为50‑55％，实现红景天苷提取产量和纯度的大幅度提升。本发明方法具有低成本、操作简单、高效率、高提取率且能够连续生产的特点，对于进行大规模地生产高纯度的红景天苷有着良好的应用前景。

    一种改造的木质纤维素酶及其应用
    7.
    发明授权
    一种改造的木质纤维素酶及其应用 有权 转让

    公开(公告)号：CN107058267B

    公开(公告)日：2020-12-01

    申请号：CN201710179423.8

    申请日：2017-03-23

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩

    IPC分类号： C12N9/42 ,  C12P19/14 ,  C12P19/02

    摘要： 本发明涉及一种改造的木质纤维素酶及其应用，在碳水化合物结合区进行如下改造：碳水化合物结合区第14位的丝氨酸替换为天冬氨酸；或者，碳水化合物结合区第21位的丝氨酸替换为天冬氨酸；或者碳水化合物结合区第24位的苏氨酸替换为天冬氨酸；或者碳水化合物结合区第14位的丝氨酸以及第21位的丝氨酸同时替换为天冬氨酸；或者碳水化合物结合区第14位的丝氨酸、第21位的丝氨酸以及第24位的苏氨酸同时替换为天冬氨酸；本发明所述改造的碳水化合物结合区使得与包含亲本碳水化合物结合区的亲本纤维素酶相比，水解活性提高，亲本碳水化合物结合区可操作地通过连接区与所述纤维素酶中存在的相同的纤维素酶催化结构域相连。

    合成HMO的方法
    9.
    发明授权
    合成HMO的方法 有权

    公开(公告)号：CN117867054B

    公开(公告)日：2024-09-27

    申请号：CN202310029214.0

    申请日：2023-01-09

    申请人： 山东恒鲁生物科技有限公司

    发明人： 方诩 ,  韩丽娟 ,  李凤仪 ,  广濑芳彦

    IPC分类号： C12P19/12 ,  C12R1/645

    摘要： 本发明涉及一种利用酵母基因工程高产乳糖‑N‑二糖的方法。本发明的技术方案是：一种乳糖‑N‑二糖（LNB）的制备方法，包括：a)反应液中含有酵母基因工程菌株；b)以N‑乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）与乳糖和/或半乳糖为反应底物。本发明成功构建了基因修饰的乳酸克鲁维酵母基因工程菌和马克斯克鲁维酵母基因工程菌菌株，且利用其以乳糖和/或半乳糖与GlcNAc为底物快速高效合成了LNB，不仅简化了工艺，且缩短了制备路线，反应条件简单，通过使用廉价的乳糖为原料，无需额外添加昂贵的酶催化剂和ATP，节省了生产成本（包括时间成本与金钱成本）。