公开(公告)号：CN116769808A

公开(公告)日：2023-09-19

申请号：CN202310168797.5

申请日：2023-02-27

Applicant: 江南大学 ,  华熙生物科技股份有限公司

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  陈逸晗 ,  王浩 ,  王芬 ,  陈柔霖 ,  张文立

IPC: C12N15/54 ,  A23C9/152 ,  A23C9/16 ,  A23L33/21 ,  C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12P19/00 ,  C12N15/70 ,  A61K31/702 ,  A61P1/14 ,  A61P1/00 ,  A61P37/02 ,  A61K8/60 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种专一生产2′‑岩藻糖基乳糖的菌株及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明公开了一种编码SAMT蛋白的核酸分子，核酸分子包括如SEQ ID NO.2所示序列或与SEQ ID NO.2具有至少98％序列同一性的核苷酸序列。该核酸分子编码的SAMT蛋白来源于Azospirillumlipoferum，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该蛋白具有优越的α1,2‑岩藻糖基转移酶催化活性和严格的底物特异性，在摇瓶发酵实验过程中，重组大肠杆菌BSS2生产2′‑岩藻糖基乳糖的能力为8.03g/L，在5L发酵罐中，2′‑岩藻糖基乳糖的产量达到112.56g/L，为目前报道的最高产量，具备工业化应用的潜力。

公开(公告)号：CN113684164B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202110900122.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  罗国聪

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑新四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明过表达β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶，β‑1,4‑半乳糖基转移酶和/或UDP‑葡萄糖4差向异构酶的编码基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因，并通过组合调控乳酰‑N‑新四糖合成途径中lgtA，Aa‑β‑1,4‑GalT和galE的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑新四糖的能力为0.91 g/L，在3 L发酵罐中，乳酰‑N‑新四糖的产量达到12.14 g/L，具备工业应用的前景。

公开(公告)号：CN113512544B

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202110797099.2

申请日：2021-07-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  武彦昌 ,  陈秋铭 ,  张文立

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/02 ,  C12P19/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的甘露糖异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了来源于微生物Deltaproteobacteria bacterium的甘露糖异构酶作为亲本，利用基因突变技术，第37位的精氨酸替换成赖氨酸和第164位的甘氨酸替换成亮氨酸，得到双突变体R37K/G164L。在温度为60℃时，测得野生酶的半衰期为46.27min,突变体酶R37K/G164L的半衰期为185.83min，两点突变体R37K/G164L在60℃的半衰期为野生酶半衰期的4倍，突变体酶相对于野生酶热稳定性明显的提高。这一发现对于研究更多热稳定性甘露糖异构酶具有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN114107152B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202111404385.4

申请日：2021-11-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  陈耕 ,  朱莺莺 ,  吴昊

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产3‑岩藻糖基乳糖微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明通过筛选高效的α‑1,3‑岩藻糖基转移酶基因，并通过组合调控3‑岩藻糖基乳糖合成途径中manC、manB、wcaG和gmd在大肠杆菌中的表达，使大肠杆菌拥有生产3‑岩藻糖基乳糖的合成能力，并能够精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产3‑岩藻糖基乳糖的能力为2.01g/L，在3L发酵罐中，3‑岩藻糖基乳糖的产量达到20.3g/L，具备良好工业应用的前景。

公开(公告)号：CN111979168B

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202010834657.3

申请日：2020-08-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  万李

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/90 ,  C12N9/12 ,  C12N9/10 ,  C12N9/38 ,  C12N9/78 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰‑N‑三糖II产量的基因工程菌及生产方法，属于微生物基因工程领域。本发明通过组合调控乳酰‑N‑三糖II合成途径中glmM，glmU，glmS以及lgtA的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力，敲除大肠杆菌宿主乳酰‑N‑三糖II合成途径中wecB，nagB和lacZ的表达，进一步提高乳酰‑N‑三糖II的产量，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑三糖II的能力由0.53g/L提升至4.82g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑三糖II的产量达到46.2g/L，具备工业应用的前景。

公开(公告)号：CN113308456A

公开(公告)日：2021-08-27

申请号：CN202110496246.2

申请日：2021-05-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 张文立 ,  沐万孟 ,  陈佳俊 ,  陈丁 ,  徐炜 ,  陈秋铭

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性增强的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了以来源于微生物Thermoclostridium caenicola的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，将107位的甘氨酸Gly突变为脯氨酸Pro，155位的苯丙氨酸Phe突变为酪氨酸Tyr，162位的天冬氨酸Asp突变为苏氨酸Thr，70位的丙氨酸Ala突变为脯氨酸Pro，获得单点突变体酶G107P、F155Y、D162T、A70P和四点突变体酶G107P/F155Y/D162T/A70P，热力学和动力学稳定性得到了提高，在工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN111979168A

公开(公告)日：2020-11-24

申请号：CN202010834657.3

申请日：2020-08-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  万李

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/90 ,  C12N9/12 ,  C12N9/10 ,  C12N9/38 ,  C12N9/78 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰-N-三糖II产量的基因工程菌及生产方法，属于微生物基因工程领域。本发明通过组合调控乳酰-N-三糖II合成途径中glmM，glmU，glmS以及lgtA的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力，敲除大肠杆菌宿主乳酰-N-三糖II合成途径中wecB，nagB和lacZ的表达，进一步提高乳酰-N-三糖II的产量，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰-N-三糖II的能力由0.53g/L提升至4.82g/L，在3L发酵罐中，乳酰-N-三糖II的产量达到46.2g/L，具备工业应用的前景。

公开(公告)号：CN108018278B

公开(公告)日：2020-05-08

申请号：CN201810060068.7

申请日：2018-01-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  黄嘉苇 ,  江波 ,  张涛

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明提供的一种Dorea sp.DPEase的突变体酶A38E/G105A，其最适催化条件没有发生改变，在最适催化条件下，酶催化底物D‑果糖生成D‑阿洛酮糖的相对酶活则提高了38.6％，这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN110684754A

公开(公告)日：2020-01-14

申请号：CN201911024030.5

申请日：2019-10-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  徐炜 ,  张振霞

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23K20/189 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种真菌毒素ZEN降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明公开了来源于Gliocladium roseum MA918的玉米赤霉烯酮降解酶(简称ZENG酶)作为亲本，利用基因突变技术，第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成苯丙氨酸Phe，得到双突变体H134F/S136F。最适催化条件下，酶在53℃保温2min后残余酶活提高了36％；保温5min后的残余酶活提高了33％；保温7min后残余酶活提高了12％。在58℃保温2min后残余酶活提高了34％，保温5min后的残余酶活提高了13％。

公开(公告)号：CN110669745A

公开(公告)日：2020-01-10

申请号：CN201911023315.7

申请日：2019-10-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  张振霞 ,  徐炜

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的玉米赤霉烯酮降解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的玉米赤霉烯酮降解酶为亲本酶，将第134位的组氨酸His和136位的丝氨酸Ser同时替换成亮氨酸Leu，得到双突变体H134L/S136L。H134L/S136L在53℃保温2min后残余酶活提高了45％；保温5min后的残余酶活分别提高了38％；保温7min后残余酶活提高了38％。在58℃保温2min后残余酶活提高了41％，保温5min后的残余酶活提高了32％。这一发现对于制备高热稳定性的工业化玉米赤酶烯酮降解酶具有重要的应用价值。