公开(公告)号：CN113917065A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111159401.8

申请日：2021-09-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 熊磊 ,  沐万孟 ,  陈尚卫 ,  朱松 ,  罗国聪 ,  顾小红 ,  范大明 ,  赵建新

IPC: G01N30/96

Abstract: 本发明公开了一种利用离子色谱同时测定乳糖‑N‑丙糖II和乳糖‑N‑新四糖的检测方法，属于分析化学技术领域。本发明首先用超纯水溶解乳糖‑N‑四糖(LNnt)和乳糖四糖II(LNT II)标准品，配置成不同浓度的标准溶液，进行阴离子交换色谱‑脉冲安培法进行检测获得标准曲线，再对待测样品中LNT II和LNnT的浓度。本发明中LNT II的仪器检出限为1.4mg/L、定量限为15.1mg/L，LNnT仪器检出限为2.8mg/L、定量限为16.4mg/L。本发明对LNT II和LNnT的回收率均在95％‑103％之间，具有良好的重现性，能够用于准确检验合成过程是否完成。

公开(公告)号：CN113684164A

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN202110900122.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  罗国聪

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑新四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明是在本团队之前的构建完成的敲除相关基因的菌株基础上，过表达β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶，β‑1,4‑半乳糖基转移酶和/或UDP‑葡萄糖4差向异构酶的编码基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因，并通过组合调控乳酰‑N‑新四糖合成途径中lgtA，Aa‑β‑1,4‑GalT和galE的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑新四糖的能力为0.91g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑新四糖的产量达到12.14g/L，具备工业应用的前景。

公开(公告)号：CN113684164B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202110900122.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  罗国聪

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑新四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明过表达β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶，β‑1,4‑半乳糖基转移酶和/或UDP‑葡萄糖4差向异构酶的编码基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因，并通过组合调控乳酰‑N‑新四糖合成途径中lgtA，Aa‑β‑1,4‑GalT和galE的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑新四糖的能力为0.91 g/L，在3 L发酵罐中，乳酰‑N‑新四糖的产量达到12.14 g/L，具备工业应用的前景。