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公开(公告)号:CN117660377A
公开(公告)日:2024-03-08
申请号:CN202311483988.7
申请日:2023-11-07
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明涉及一种在灰盖鬼伞中高效同源重组表达担子菌漆酶的方法,属于基因工程及发酵工程领域。本发明以来源于灰盖鬼伞FA2222的漆酶酶基因lcc5为目的基因、以灰盖鬼伞FA2222为表达宿主构建了同源重组表达漆酶的灰盖鬼伞重组菌Cclcc5‑13。在此基础上,利用RNA干扰技术对灰盖鬼伞FA2222基因组中的关键几丁质酶基因ChiE2进行沉默表达,获得灰盖鬼伞重组菌Cclcc5‑antiChiE2‑5。经3‑L罐发酵后发现,其胞外漆酶活性及漆酶生产效率分别为38.2U/mL和0.35U/mL·h,分别是对照菌的1.5和1.8倍,实现了漆酶在灰盖鬼伞中的高效同源重组表达。
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公开(公告)号:CN117467631A
公开(公告)日:2024-01-30
申请号:CN202311303268.8
申请日:2023-10-10
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种脂肪酸脱羧酶P450BSβ突变体及其在γ‑内酯制备中的应用,其中脂肪酸脱羧酶P450BSβ突变体是由野生型P450BSβ的氨基酸序列在第78位、85位、173位和290位突变得到的,可以利过氧化氢为直接的电子供体,脂肪酸为底物直接一步氧化内酯化为内酯。催化的底物范围扩展为链长为C6~C18链长的脂肪酸,含官能团的脂肪酸,含芳香(杂)环的脂肪酸。本发明所述的催化剂效率更高、反应更简洁、底物范围更广,在制备γ‑内酯方面具有良好的应用前景和工业价值。
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公开(公告)号:CN116355865A
公开(公告)日:2023-06-30
申请号:CN202310136182.4
申请日:2023-02-20
Applicant: 安徽大学绿色产业创新研究院
Abstract: 本发明公开了一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用,本发明以来自海洋未培养微生物来源的酰基辅酶A合成酶为基础,通过Funclib设计突变位点后全基因合成,获得突变基因。含有突变质粒的工程菌诱导表达后,获得比酶活提高且稳定性提升的酰基辅酶A合成酶。以棕榈酸为底物时,突变体的比酶活提高了7.0倍,该突变体在酶法检测游离脂肪酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。
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公开(公告)号:CN116334040A
公开(公告)日:2023-06-27
申请号:CN202210935828.0
申请日:2022-08-04
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种来源于球托霉菌属的壳聚糖酶基因Csn1、表达载体、重组菌株、将重组菌株生产的壳聚糖酶用在降解壳聚糖制备壳寡糖中的方法及应用。本发明通过将球托霉菌属中的壳聚糖酶基因重组于毕赤酵母工程菌,获得能够高效表达该基因的重组毕赤酵母工程菌株Pichia pastoris GS115/pPIC9K‑Csn1。产壳聚糖酶的重组毕赤酵母工程菌株,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO.M 20221107,保藏日期2022年7月14日。利用本发明所述重组毕赤酵母工程菌株生产的壳聚糖酶纯度高,纯化成本低,水解壳聚糖的产物为壳三糖,应用价值大,有望将本发明壳聚糖酶进行大量制备用于壳三糖的大量生产,具有实际应用价值。
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公开(公告)号:CN116286575A
公开(公告)日:2023-06-23
申请号:CN202310120217.5
申请日:2023-02-03
Applicant: 安徽大学绿色产业创新研究院
Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α‑淀粉酶的方法,属于基因工程和生物工程领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以pBHVY为载体骨架,以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因,以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主,改造了启动子,筛选了信号肽,优化了RBS序列,并对获得的重组菌进行了3‑L罐发酵补料工艺优化。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达生淀粉α‑淀粉酶,以其为生产菌株,摇瓶发酵48h,发酵上清液中生淀粉α‑淀粉酶的酶活为4824.2U/mL,经3‑L罐发酵培养后胞外生淀粉α‑淀粉酶的酶活可高达49082U/mL,是目前文献报道的最高水平。
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公开(公告)号:CN116064427A
公开(公告)日:2023-05-05
申请号:CN202211375350.7
申请日:2022-11-04
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用,本发明以来自海洋未培养微生物来源的酰基辅酶A合成酶为基础,通过Funclib设计突变位点后全基因合成,获得突变基因。含有突变质粒的工程菌诱导表达后,获得比酶活提高且稳定性提升的酰基辅酶A合成酶。以棕榈酸为底物时,突变体的比酶活提高了4.4倍。在比活力提高的同时,突变体的稳定性也得到了提升,该突变体在酶法检测游离脂肪酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。
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公开(公告)号:CN115873772A
公开(公告)日:2023-03-31
申请号:CN202210914414.X
申请日:2022-08-01
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达生淀粉α‑淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组菌及其应用。本发明枯草芽孢杆菌重组菌以pBHSS142为表达载体、以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因、以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WB600为表达宿主,在目的基因的上游插入了信号肽基因,改造了启动子、5'非翻译区序列和近端编码序列。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达α‑淀粉酶,以其为生产菌株,摇瓶发酵48h,可将发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至2974U/mL。
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公开(公告)号:CN112921043B
公开(公告)日:2022-06-14
申请号:CN202110280063.7
申请日:2021-03-16
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了突变的核酸、表达载体和制备高比活力漆酶突变体及其方法,该突变的核酸的序列如SEQ IDNO:1所示;本发明通过ep‑PCR技术快速获取突变漆酶基因,以形成庞大的突变体文库;同时在蛋白N‑末端构建组氨酸标签,便于后续利用标签进行突变体菌株的高通量筛选,实现了漆酶基因在毕赤酵母中的异源表达和改造,重组毕赤酵母突变菌株酶蛋白的比活力提高约2倍,降低该漆酶的使用成本,提升重组毕赤酵母菌的工业应用潜力。
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公开(公告)号:CN109666592B
公开(公告)日:2022-04-26
申请号:CN201810757377.X
申请日:2018-07-11
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种真菌漆酶表达菌株及其构建方法和应用,通过遗传学手段对漆酶高产菌株—栓菌AH28‑2进行改造,即在该菌株中过表达热激蛋白ThHspA1,改造后的菌株Trametes hirsuta AH28‑2(ThHspA1‑5)可在添加1/10初始剂量诱导剂的条件下使漆酶产量提高2倍,以该菌株生产漆酶具有高效环保等优点。
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公开(公告)号:CN113215179A
公开(公告)日:2021-08-06
申请号:CN202110389097.X
申请日:2021-04-12
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开真菌来源的漆酶基因,涉及生物技术领域,漆酶基因为lac1,所述lac1的cDNA序列如SEQ ID NO.2所示,或者lac1具有编码如SEQ.ID.NO.3所示氨基酸序列的碱基序列。本发明还提供携带上述漆酶基因表达载体的重组毕赤酵母工程菌株及其应用。本发明的有益效果在于:本发明异源表达了Trametes sp.中新鉴定的漆酶Lac1。本发明所获得的重组漆酶具有很好的热稳定性且具有良好的金属离子、有机溶剂及抑制剂耐受性,可催化靛蓝等染料脱色,在工业上具有很好的应用前景。
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