一种高温普鲁兰酶及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN114774441A

    公开(公告)日:2022-07-22

    申请号:CN202210289514.8

    申请日:2022-03-23

    Abstract: 本发明公开了一种高温普鲁兰酶及其制备方法与应用。所述的酶序列见SEQ ID NO:2。本发明基于热球菌(Thermococcus sp.MCCC 1A01790)基因组测序数据分析获得普鲁兰酶PulTE基因序列,并对PulTE基因序列进行优化,通过人工合成的方法获得优化后的普鲁兰酶基因序列,并添加酶切位点BamHI和XhoI,将该优化后的基因克隆入pET‑28a(+)表达载体上,在大肠杆菌E.coli Rosette中进行诱导表达,纯化得到较高纯度的重组普鲁兰酶蛋白。该酶最适温度为80℃,在65~80℃条件下比较稳定;该酶具有较宽的pH作用范围,最适pH为6.5;该酶可以水解α‑(1,4)和α‑(1,6)糖苷键,对普鲁兰糖和γ‑环糊精有很强的水解作用,是一种双功能酶,在淀粉资源和普鲁兰糖的加工利用以及麦芽八糖制备方面具有优势。

    一种几丁质酶、其编码基因及应用

    公开(公告)号:CN113528490A

    公开(公告)日:2021-10-22

    申请号:CN202110631763.6

    申请日:2021-06-07

    Abstract: 本发明公开了一种几丁质酶、其编码基因及应用。本发明以弧菌Vibrio sp.MCCC1A18305的基因组DNA为模板,设计并合成引物,通过PCR扩增几丁质酶基因,将该基因克隆入pET‑22b表达载体上,在大肠杆菌E.coli BL21中进行诱导表达,采用Ni‑Sepharose亲和层析纯化得到较高纯度的重组几丁质酶蛋白。该酶最适pH为6.5,最适温度为50℃,在40~50℃、pH 5.5~6.5范围内酶活性较好;在40℃和45℃下保温12h后酶活力仍无明显降低;Ca2+和K+对该酶活性具有明显促进作用;该酶对胶体几丁质具有良好的底物特异性,其水解终产物主要是二糖和单糖,是一种外切型几丁质酶,可用于几丁质资源的开发利用和几丁寡糖的制备。

    一种内切褐藻胶裂解酶、其编码基因及应用

    公开(公告)号:CN113046378A

    公开(公告)日:2021-06-29

    申请号:CN202110203345.7

    申请日:2021-02-23

    Abstract: 本发明公开了一种内切褐藻胶裂解酶、其编码基因及应用。本发明以弧菌Vibriosp.MCCC 1A13243的基因组DNA为模板,设计并合成引物,通过PCR扩增内切褐藻胶裂解酶基因,将该基因克隆入pET‑22b表达载体上,在大肠杆菌E.coli BL21中进行诱导表达,采用Ni‑Sepharose亲和层析纯化得到较高纯度的重组内切褐藻胶裂解酶蛋白。该酶的最适温度为35℃,最适pH为8.5,在0~65℃和pH 4.5~10.5范围内稳定性良好;Co2+、Cu2+、Mn2+和Fe3+能够明显促进该酶活性;该酶对海藻酸钠降解作用最强,也能降解多聚古洛糖醛酸和多聚甘露糖醛酸,降解这三种底物的主要产物为二糖。该酶在生产褐藻寡糖尤其是褐藻二糖方面具有优势。

Patent Agency Ranking