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公开(公告)号：CN102242108A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172827.2
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高亚油酸异构酶活性的方法，包括以下步骤：将亚油酸异构酶基因(Genbank号：DQ227322)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号：M28164)的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+亚油酸异构酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将亚油酸异构酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高亚油酸异构酶活性。
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公开(公告)号：CN102242106A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171817.7
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高谷氨酸脱羧酶活力持续性的方法，包括以下步骤：将谷氨酸脱羧酶基因(Genbank号：NM_168056)连接(常规方法)在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列(Genbank号：S73336)的N端，然后插入(常规方法)酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+谷氨酸脱羧酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将谷氨酸脱羧酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，谷氨酸脱羧酶即可保持活力。
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公开(公告)号：CN102242097A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172813.0
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明提供一种使β葡聚糖酶成为酿酒酵母细胞有机组成部分的技术，使β葡聚糖酶只要酿酒酵母细胞保持存活即可保持活力，从而显著提高β葡聚糖酶活力持续性。将beta葡聚糖酶基因(Genbank号：U60830)连接(常规方法连接)在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列(Genbank号：S73336)的N端，然后插入(通过常规方法插入)酿酒酵母表达载体GAL 1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+beta葡聚糖酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将β葡聚糖酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，β葡聚糖酶即可保持活力。
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公开(公告)号：CN102242088A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171802.0
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高脂肪酶活力持续性的方法，包括以下步骤：将脂肪酶基因(Genbank号：AF229435)连接(常规方法)在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列(Genbank号：S73336)的N端，然后插入(常规方法)酿酒酵母表达载体GAL 1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+脂肪酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将脂肪酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，脂肪酶即可保持活力。
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公开(公告)号：CN102242086A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171789.9
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高植酸酶活性的方法，包括以下步骤：将植酸酶基因(Genbank号：AB508806)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号：M28164)的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+植酸酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将植酸酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高植酸酶活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102212591A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108787.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖硬脂酸酯的方法，包括：将蔗糖和硬脂酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得蔗糖硬脂酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS 115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成蔗糖硬脂酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212588A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110790.5
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成淀粉磷酸单酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O和酵母展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得淀粉磷酸单酯；本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该生物催化剂催化合成淀粉醋酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212586A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110430.5
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母表面展示脂肪酶催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入十二烯基琥珀酸酐乙醇溶液和酵母表面展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得十二烯基琥珀酸淀粉酯。所述的酵母表面展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母表面展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212576A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110107125.0
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E亚油酸酯的方法，包括：将维生素E和亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E亚油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E亚油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212574A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110343.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸亚油酸酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸亚油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸亚油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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