工程化的Cas12i核酸酶及其效应蛋白以及用途

    公开(公告)号:CN113151215B

    公开(公告)日:2022-11-18

    申请号:CN202110581290.3

    申请日:2021-05-27

    摘要: 本申请提供了一种工程化的Cas12i核酸酶;其包含一种、两种、三种或四种以下基于参比Cas12i核酸酶的突变:(1)将参比Cas12i核酸酶中与PAM相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸;和/或(2)将参比Cas12i核酸酶中参与打开DNA双链的一个或多个氨基酸替换为带芳香环的氨基酸;和/或(3)将参比Cas12i核酸酶中位于RuvC结构域并与单链DNA底物相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸;和/或(4)将参比Cas12i核酸酶中与DNA‑RNA双螺旋相互作用的一个或多个氨基酸替换为带正电的氨基酸;尤其所述参比Cas12i核酸酶为天然Cas12i核酸酶,例如天然Cas12i2核酸酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所定义。

    一种细胞诱导的方法
    65.
    发明公开

    公开(公告)号:CN113881624A

    公开(公告)日:2022-01-04

    申请号:CN202111052331.6

    申请日:2019-01-29

    IPC分类号: C12N5/077

    摘要: 一种细胞诱导的方法,具体来说涉及:诱导成纤维细胞转分化为脂肪细胞的方法,包括以下步骤:将成纤维细胞培养在培养基中,在培养基中加入Myosin抑制剂和BMP4,继续培养,直至得到脂肪细胞。还涉及一种诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的方法及其应用。所述方法包括以下步骤:将成纤维细胞培养在培养基中,在培养基中加入Myosin抑制剂,继续培养,直至得到永生化细胞。还涉及一种诱导肝细胞体外扩增的方法。还涉及Myosin抑制剂尤其是(‑)‑Blebbistatin或(S)‑(‑)‑Blebbistatin O‑Benzoate和通过所述方法获得的肝细胞在诱导肝细胞体外扩增、构建生物人工肝和构建肝脏疾病模型中的应用。

    一种突变基因及其用于构建斑色鱼鳞癣小型猪模型的用途

    公开(公告)号:CN110846321B

    公开(公告)日:2021-11-19

    申请号:CN201810952704.7

    申请日:2018-08-21

    摘要: 本发明提供一种小型猪的ABCA12突变基因,所述突变基因与野生型猪ABCA12基因相比,具有IVS49‑727A>G的突变。本发明提供了一种构建体,所述构建体包含所述ABCA12突变基因。本发明还提供了一种重组细胞,所述重组细胞由所述构建体转化受体细胞获得。本发明提供了一种制备人类斑色鱼鳞癣小型猪模型的方法,所述方法包括:改变小型猪的ABCA12基因,使ABCA12基因的位于第49号内含子的第727位碱基由A变为G。利用本发明提供的ABCA12突变基因制备大型人类斑色鱼鳞癣猪模型,研究人类斑色鱼鳞癣的发病机理,对于临床预防、诊断和治疗人类斑色鱼鳞癣具有重大的指导意义。

    一种将成纤维细胞转化为永生化细胞的方法及其应用

    公开(公告)号:CN110093310B

    公开(公告)日:2021-07-02

    申请号:CN201810083591.1

    申请日:2018-01-29

    IPC分类号: C12N5/077

    摘要: 本发明涉及一种诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的方法及其应用。所述方法包括以下步骤:将成纤维细胞培养在培养基中,在培养基中加入Myosin抑制剂,继续培养,直至得到永生化细胞。本发明还涉及诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的培养基。本发明的方法只需单个小分子或单因素处理,操作简单,重复性好,并且在体内体外均可高效进行,不涉及转基因操作,获得的永生化细胞安全性好,适用于了解细胞生长规律、探索细胞衰老原因、解决器官移植问题,还能够为治疗肿瘤、控制肿瘤细胞的增殖奠定一定的基础,具有重要的意义。

    一种用于将胚胎干细胞诱导为心肌细胞的培养基及其应用

    公开(公告)号:CN104611291B

    公开(公告)日:2020-04-28

    申请号:CN201510046646.8

    申请日:2015-01-29

    IPC分类号: C12N5/077

    摘要: 本发明提供一种用于将胚胎干细胞诱导为心肌细胞的培养基,该培养基的化学成分明确,所述培养基为化学成分明确的液体培养基,所述培养基包括基础培养基RPMI‑1640;所述培养基还包括1~3mg/L的L‑肉毒碱、0.5~2mg/L的乙醇胺、10~20mg/L的腐胺、0.01~0.02mg/L的亚硒酸钠、0.5~2mg/L的亚油酸、3~6mg/L的转铁蛋白、50‑200mg/L的维生素C和/或维生素C磷酸镁盐、50‑500μM的N乙酰半胱氨酸。本发明还提供了本发明所述的培养基的制备方法和使用方法。本发明中培养基配方的各组分明确,成本低廉,非常有利于大规模的心肌细胞制备和临床应用。