一种禽流感病毒纯化的方法

    公开(公告)号:CN105505889A

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201510995944.1

    申请日:2015-12-24

    CPC classification number: C12N7/00 C12N2760/16151

    Abstract: 本发明公开了一种禽流感病毒纯化的方法,具体包括如下步骤:两次过滤:采用不锈钢筛网对收获的含禽流感病毒抗原的半成品胚液进行两次过滤;离心:滤出液进行离心,收集上清液和沉淀;溶解:沉淀中加入PBS溶液重新溶解,并且搅拌,得到溶液;离心:溶液进行离心,收集上清液;浓缩:采用孔径为30-500K的膜包对上清液进行浓缩;分子筛层析:以葡聚糖凝胶G200为层析填料,采用纯净水平衡层析柱,以0.05M的PBS溶液为洗脱液,对浓缩液进行分子筛层析,回收禽流感病毒液;浓缩:采用膜包对回收禽流感病毒液使用进行浓缩,获得纯化后的禽流感病毒。该方法处理量大,处理速度快,能够去除胚液中80%以上的异源蛋白,病毒回收率大于85%,并且不影响病毒HA效价。

    一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法

    公开(公告)号:CN111926025B

    公开(公告)日:2023-05-05

    申请号:CN202010346610.2

    申请日:2020-04-27

    Abstract: 本发明涉及反向遗传操作技术领域,公开了一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法。分别将新城疫病毒的NP、P和L基因以及表达T7 RNA聚合酶的DE3基因克隆进pXJ40载体,获得质粒pXJ40‑NP、pXJ40‑P、pXJ40‑L和pXJ40‑DE3;将新城疫病毒的全基因组cDNA克隆进pBR322质粒中得到pBR322‑DHN3;将NP基因编码区部分密码子统一替换成使用频率最高的密码子,替换到pBR322‑DHN3质粒上,形成新质粒pBR322‑mNPDHN3;采用上述5种质粒共转染BHK‑21细胞,得到拯救病毒rDHN3‑mNP。本发明方法更利于病毒的拯救和病毒致病机制的研究。

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