一种抗人脂质运载蛋白2单克隆抗体的制备方法

    公开(公告)号:CN118515757A

    公开(公告)日:2024-08-20

    申请号:CN202410761454.4

    申请日:2024-06-13

    Abstract: 本发明公开了一种抗人脂质运载蛋白2单克隆抗体的制备方法,以重组大肠杆菌表达的重组人Lcn‑2作为抗原,免疫Balb/c小鼠后,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选,获得能稳定分泌Lcn‑2抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射至小鼠腹腔,收集腹水后,通过辛酸‑硫酸铵沉淀法和Protein A亲和柱层析法两步纯化获得高纯度Lcn‑2单克隆抗体。本发明方法制备的Lcn‑2单克隆抗体能特异性结合于重组人Lcn‑2,也能特异性结合于人尿液中天然Lcn‑2,具有特异性好、结合率高的特点,可以大规模生产,广泛应用于免疫法检测人尿液以及血清中Lcn‑2含量。

    一种利用微通道反应器酶解制备游离虾青素的方法

    公开(公告)号:CN111041060A

    公开(公告)日:2020-04-21

    申请号:CN201911178459.X

    申请日:2019-11-27

    Abstract: 本发明公开了一种利用微通道反应器酶解制备游离虾青素的方法,所述方法为:以内径为0.7–1.0mm、长度为5–10m的不锈钢管为微通道反应器,以虾青素油为油相,以脂肪酶水溶液为水相,在油相和水相均以20–150μL/min速度通入、温度30–40℃、油相在微通道中的滞留时间为60–200min的条件下进行酶解反应,获得含游离虾青素的虾青素油。本发明在微通道反应器中利用脂肪酶催化虾青素酯水解,大大地缩短了反应时间,且具有较高的转化率,虾青素油的游离虾青素含量由2.13mg/g提高到19.7mg/g,提高了8.25倍;降低了反应成本,具有经济高效的优势。

    一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法

    公开(公告)号:CN109627309A

    公开(公告)日:2019-04-16

    申请号:CN201811621708.3

    申请日:2018-12-28

    Abstract: 本发明公开了一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,所述方法为:将蚕丝丝素溶于CaC12水溶液中,加热煮沸至丝素溶解后,过滤,取滤液,获得丝素溶液;将丝素溶液与pH 7.5‑8.0的缓冲液混合,于35‑37℃水浴中预热5‑10min,加入舍雷肽酶构成酶解体系,35‑37℃水浴振荡酶解完成后,煮沸灭酶活,冷却后离心,取上清液,透析去除Ca2+后,冷冻干燥,获得丝素肽。本发明使用舍雷肽酶水解丝素,具有水解速度快、水解度易控制的优点;(2)酶解制备的丝素肽具有较好的抗氧化活性;(3)本发明具有方法简单、环境友好,易于实现工业化应用的优点。

    一种从金枪鱼眼中提取透明质酸的方法

    公开(公告)号:CN107522796A

    公开(公告)日:2017-12-29

    申请号:CN201710768321.X

    申请日:2017-08-31

    CPC classification number: C08B37/0072 C08B37/0003

    Abstract: 本发明公开了一种从金枪鱼眼中提取透明质酸的方法,所述方法为:将金枪鱼眼粉末加入去离子水中浸提完全,离心,获得上清液;向上清液中加入胰蛋白酶,在20~45℃、pH为7.0~8.5的条件下反应60~180min,反应完全后,获得透明质酸粗品;将透明质酸粗品用去离子水配制成质量浓度1-5%透明质酸溶液,加入终浓度0.1~0.3mol/L氯化钠,制成母液;向母液中加入质量浓度1~10%十六烷基氯化吡啶水溶液,30℃下搅拌反应完全,获得透明质酸;金枪鱼所提取的透明质酸分子量较小,为0.470MDa,工艺路线简单易行,所得透明质酸纯度较高,且工艺流程中透明质酸损失较小。

    一种人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体片段的分离方法

    公开(公告)号:CN104313091A

    公开(公告)日:2015-01-28

    申请号:CN201410505048.8

    申请日:2014-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法:将温敏载体NHS-PNIPAM固定化木瓜蛋白酶于pH7.0,0.05mol/LPBS缓冲液中,加入人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体,20~60℃水浴反应2~24h,反应液于40℃,10000r/min离心15min,沉淀为NHS-PNIPAM固定化木瓜蛋白酶,回收利用,滤液为含抗体Fab片段的水解液,采用蛋白L亲和层析对含抗体片段的水解液进行分离纯化,获得抗体Fab片段;本发明方法操作简便、纯化步骤少、所得抗体片段纯度高;本发明中制备的抗体Fab片段只需经过一步纯化就可达到96.0%以上的纯度。

    一种2’-脱氧-5-氟尿苷的微生物合成方法

    公开(公告)号:CN104293867A

    公开(公告)日:2015-01-21

    申请号:CN201410504731.X

    申请日:2014-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种2’-脱氧-5-氟尿苷的微生物合成方法,所述的方法为:以2’-脱氧核糖-1-磷酸二环己胺盐和5-氟尿嘧啶为底物,以产嘧啶核苷磷酸化酶的菌株经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以pH值为6.5~8.5的磷酸缓冲液为反应介质,在45~65℃条件下进行转化反应,反应结束后,获得2’-脱氧-5-氟尿苷;本发明方法2’-脱氧-5-氟尿苷的转化率达到了79.36%,一步酶促合成,条件温和,反应时间短,并且避免了底物脱氧核糖供体来源不足、价格昂贵的问题;应用全细胞进行催化,无需进行酶的分离纯化,反应结束后菌体回收方便,有利于工业规模化生产。

    磺胺二甲基嘧啶亲和膜及其在抗体分离纯化中的应用

    公开(公告)号:CN102553467B

    公开(公告)日:2014-06-11

    申请号:CN201110449444.X

    申请日:2011-12-29

    Abstract: 本发明公开了一种磺胺二甲基嘧啶亲和膜,所述的磺胺二甲基嘧啶的制备方法包括如下步骤:(1)取醋酸纤维素膜,先在碱性条件下充分水解,然后加入环氧氯丙烷进行环氧活化,反应结束后在抽滤条件下用去离子水洗至中性,得到环氧活化后的膜;(2)将磺胺二甲基嘧啶溶解于pH10~12的碱性缓冲溶液中,然后将步骤(1)获得的环氧活化后的膜分散在上述溶液中,在50~65℃反应24h~36h,在抽滤条件下用去离子水洗至滤出液在280nm处的紫外吸收接近于0,干燥后即得磺胺二甲基嘧啶亲和膜。所述的磺胺二甲基嘧啶亲和膜对于抗体具有较好的吸附性能,尤其适于分离纯化免疫球蛋白IgG。

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