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公开(公告)号：CN102296101B
公开(公告)日：2013-06-05
申请号：CN201110268705.8
申请日：2011-09-08
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法，包括：将紫菜干粉、酵母展示型聚半乳糖醛酸酶加入水中混匀，于35～37℃搅拌反应30～45分钟，再于28～35℃利用功率730～750W的超声波破碎1～2小时，分离纯化制得紫菜蛋白；将紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混匀，于35～40℃搅拌反应2～2.5小时，分离纯化制得紫菜降血压肽；利用β-环糊精包埋紫菜降血压肽。本发明利用酵母表面展示型聚半乳糖醛酸酶协同超声波处理溶出紫菜蛋白，再经酵母表面展示型蛋白酶酶解及微胶囊包埋技术制备紫菜降血压肽微胶囊，能获得较高得率、较高活力持续性的紫菜降血压肽。
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公开(公告)号：CN102242095A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172791.8
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高alpha半乳糖苷酶活性的方法，包括以下步骤：将α半乳糖苷酶基因(Genbank号：X03102)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号：M28164)的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+α半乳糖苷酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将α半乳糖苷酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高α半乳糖苷酶活性。
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公开(公告)号：CN102242094A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171805.4
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高alpha半乳糖苷酶活力持续性的方法，包括以下步骤：将alpha半乳糖苷酶基因连接在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子下游MFα1信号肽序列的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+alpha半乳糖苷酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将α半乳糖苷酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，α半乳糖苷酶即可保持活力。
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公开(公告)号：CN102212593A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110339.3
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成麦芽糖硬脂酸酯的方法，包括：将麦芽糖和硬脂酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得麦芽糖硬脂酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成麦芽糖硬脂酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212587A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110789.2
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成淀粉黄原酸酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入CS2和酵母展示脂肪酶，在45～55℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得淀粉黄原酸酯；所述酵母展示脂肪酶通过如下方法制备：将线性化的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成淀粉黄原酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102212585A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108817.7
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成淀粉磷酸酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入NaH2PO4和酵母展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得淀粉磷酸酯。所述的酵母展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成淀粉磷酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212584A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108794.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成淀粉醋酸酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入醋酸酐和酵母展示脂肪酶，在65～75℃下搅拌反应2～2.5小时，分离、纯化制得淀粉醋酸酯。所述的酵母展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成淀粉醋酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212583A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108736.7
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成辛烯基琥珀酸淀粉酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入辛烯基琥珀酸酐和酵母展示脂肪酶，在34～36℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得辛烯基琥珀酸淀粉酯钠。所述的酵母展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成辛烯基琥珀酸淀粉酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212573A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110322.8
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸DHA酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和DHA溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸DHA酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸DHA酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212584B
公开(公告)日：2014-07-16
申请号：CN201110108794.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成淀粉醋酸酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入醋酸酐和酵母展示脂肪酶，在65～75℃下搅拌反应2～2.5小时，分离、纯化制得淀粉醋酸酯。所述的酵母展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成淀粉醋酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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