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公开(公告)号：CN109880783B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201910318050.7
申请日：2019-04-19
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/56 , C12N9/44 , C12N15/70 , C12P19/14 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12P7/48 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种嗜热重组II型普鲁兰酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中异源表达II型普鲁兰酶，获得一种嗜热重组II型普鲁兰酶，其最适pH为6.6，在pH 5.8‑8.0条件下有较好的pH耐受性，最适温度为95℃，在95℃保温10h，剩余酶活大于50％，能够在强还原条件下展现出较高的比酶活，如在培养环境中加入DTT，能使Sumo‑PulPy比酶活提升237.2％。本发明还提供了II型普鲁兰酶Sumo‑PulPy的组合截断突变体△28N+△791C，该酶突变体的比酶活为32.18±0.92U/mg，是野生酶的5.99倍，具有重要的工业应用价值和潜力。
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公开(公告)号：CN109337891B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201811493273.9
申请日：2018-12-07
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种热稳定性提高的苯丙氨酸氨基变位酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的苯丙氨酸氨基变位酶的突变体序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的比酶活相对于野生型略有提高，在50℃处理1h仍有83％残留酶活性，温度稳定性相比野生酶有了大幅度的提高，更适合应用于工业生产。
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公开(公告)号：CN111172213A
公开(公告)日：2020-05-19
申请号：CN202010058267.1
申请日：2020-01-18
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种用双酶串联制备L-2-氨基丁酸的方法，属于生物工程领域。本发明通过分别培养表达L-谷氨酸变位酶和L-天冬氨酸-β-脱羧酶的重组大肠杆菌，获得L-谷氨酸变位酶和L-天冬氨酸-β-脱羧酶。将两种酶以一定质量比添加到反应体系中，以L-谷氨酸为底物，进行酶反应制备L-2-氨基丁酸，当L-天冬氨酸-β-脱羧酶的用量为2mg/mL，反应24h，转化生成8.5mmol/L L-2氨基丁酸，摩尔转化率为85.00％。此法与化学生产法相比，生产工艺安全，无环境污染。与以苏氨酸为底物的多酶合成体系相比，底物价格更便宜，工艺更简单。
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公开(公告)号：CN107828673B
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201711375210.9
申请日：2017-12-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高效表达来源于雅致放射毛霉的羧肽酶Y的方法，属于生物工程领域。本发明通过构建表达重组质粒pPICZα‑procpy，电转化毕赤酵母GS115，通过不断提高抗生素的方法，筛选得到具有不同拷贝数的表达重组菌株，再往得到的重组菌株中转入来源于毕赤酵母的伴侣蛋白BIP，最终得到一株高效表达来源雅致放射毛霉的羧肽酶Y的表达重组菌株，诱导表达6天之后，表达量达到了525±20mg/L。
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公开(公告)号：CN106755016B
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201611094281.7
申请日：2016-12-02
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种雅致放射毛霉羧肽酶Y基因及其应用，属于生物技术领域。本发明所述的羧肽酶Y基因全长是通过提取雅致放射毛霉的RNA，反转录获得cDNA后，通过末端扩增技术(RACE)获得的，该基因全长1557bp，编码518个氨基酸。本发明为首次从雅致放射毛霉菌PEP001(A.elegans PEP001)中成功克隆出CPY基因全长，并将其编码基因在GS115中进行重组表达。酶原经过体外激活、纯化，测定了成熟CPY的基本酶学性质，为对其进行更深入的研究提供前提条件。
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公开(公告)号：CN110184259A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910612907.6
申请日：2019-07-09
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种厌氧芽孢杆菌来源普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建的普鲁兰酶突变体K419R，在热稳定性与野生型普鲁兰酶相差不大的情况下，其比酶活是野生型普鲁兰酶的1.30倍；普鲁兰酶突变体K419R/T245C/A326C，在比酶活与野生型普鲁兰酶相同的情况下，其热稳定性较野生型大幅提升；而突变体K419R/T245C/A326C/W651C/V707C的比酶活是野生型的1.47倍，且具有良好的热稳定性。因此本发明的普鲁兰酶突变体能够满足淀粉脱支过程高温条件的要求，同时提高淀粉脱支和水解效率，对于普鲁兰酶的工业化应用至关重要。
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公开(公告)号：CN106479948B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201611166229.8
申请日：2016-12-16
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/75 , C12C11/00 , C12N9/44 , C12P7/06 , C12P19/16 , C12P19/00 , C12P19/04 , C12R1/125
CPC分类号： Y02E50/17
摘要： 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌的方法，属于发酵工程领域。本发明通过构建重组表达普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌，并在以此重组菌发酵生产普鲁兰酶的过程中，添加终浓度为0.4％的甜菜碱或0.2％的吐温‑80或0.4％的司盘80，普鲁兰酶的分泌效率可以达到76.13％、68.72％和72.84％，胞外pulA酶活分别达到22.95IU/ml、19.13IU/ml、20.11IU/ml。
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公开(公告)号：CN109402097A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811234783.4
申请日：2018-10-23
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种L-天冬氨酸α-脱羧酶的基因工程菌株以及应用，具体涉及一种以L-天冬氨酸α-脱羧酶的基因工程菌株催化合成β-丙氨酸的方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明通过建立并优化全细胞催化工艺，采用底物分批补加的方式，加入四次底物后，野生型重组菌株转化23h生成β-丙氨酸约123.81g/L；K221R突变株转化23h可使产物β-丙氨酸浓度达到134.72g/L；G369A突变株转化23h可使产物β-丙氨酸浓度达到136.33g/L。此方法使β-丙氨酸产量得到较大提高，这一发现对于工业化制备β-丙氨酸具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN109370997A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811415904.5
申请日：2018-11-26
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种苯丙氨酸氨基变位酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的苯丙氨酸氨基变位酶的突变体序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的比酶活相对于野生型提高了1.13倍，在50℃处理1小时仍有50％残留酶活性，温度稳定性相比野生酶有了较大的提高。同时该突变体也具备了更好的pH稳定性，有利于以后的工业生产。
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公开(公告)号：CN109055346A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201811131112.5
申请日：2018-09-27
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种热稳定性提高的L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶，属于基因工程技术领域。本发明通过对来源于赤拟谷盗的L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶进行定点突变，获得K49R，G369A和K221R三个酶突变体，将突变体重组质粒转化至大肠杆菌BL21中，表达分离纯化后，催化底物L‑天冬氨酸生成β‑丙氨酸。在50℃处理温度下，K49R可以使热稳定性相较于野生酶提高14％，G369A可以使热稳定性相较于野生酶提高20％，K221R可以使热稳定性相较于野生酶提高23％。其中，K221R还可以使比酶活达到约320U/g，相较于野生酶酶活提高了23％。这一发现对于工业化制备β‑丙氨酸具有重要的研究价值。
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