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公开(公告)号:CN102533857A
公开(公告)日:2012-07-04
申请号:CN201210039495.X
申请日:2012-02-21
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞,构建了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3,以及基于该载体的包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系,利用该细胞系作为核供体细胞,为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3导入牛胎儿成纤维细胞,荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况,并经G418筛选获得阳性细胞,经PCR鉴定,证实目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组;最后,将转染HBD3基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞,获得转基因克隆胚。
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