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公开(公告)号：CN112301117A
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN202011140853.7
申请日：2020-10-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12N15/10 , G16B5/00 , G16B25/20
Abstract: 本发明公开了一种基于高通量测序构建目标蛋白互作网络的方法，该方法将BD‑诱饵与猎物文库共转化Y2H酵母菌株，在YPDplus培养基中30℃培养4h后，弃上清，加入1mL无菌水基悬浮，取100μL悬浮菌液再加入10ml SD/‑Leu/‑Trp/‑His/‑Ade液体培养基中震荡培养24h、72h和80h后分别取样，以这些菌液为模版进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测菌液筛选程度，将产物回收之后进行高通量测序、de novo组装后进行基因丰度与差异分析，取差异基因即为该文库中与目的基因互作的蛋白编码基因，从而初步构建目标蛋白的互作网络。该方法同时适用于无参考基因物种目标蛋白互作网络的构建。该方法简化了酵母双杂交筛库的步骤，不受单次筛选克隆数限制，找到单个文库中目标蛋白的所有互作蛋白。
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公开(公告)号：CN109943573A
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201910264318.3
申请日：2019-04-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CmWRKY7基因改变切花菊萜烯类挥发物含量的方法，包括以下步骤：从茶用菊‘滁菊’中克隆CmWRKY7基因；构建CmWRKY7基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行筛选培养初步获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmWRKY7内源基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的萜烯类挥发物含量改变。本发明通过转化内源CmWRKY7转录因子并正常转录表达，从而调控了萜烯生物合成，为利用基因工程技术提高切花菊芳香品质提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN103004585B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201210534830.3
申请日：2012-12-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用卡那霉素快速筛选菊花转基因植株的方法，包括以下几个步骤：（1）确定菊花叶盘不定芽分化Kan筛选浓度、菊花茎段生根Kan筛选浓度以及Kan溶液浸泡筛选浓度和观察时间；（2）对菊花转化植株进行分化再生阶段和生根阶段的筛选得到生根株系；再将生根株系经Kan溶液浸泡筛选后得到转基因菊花Kan抗性株系；（3）转基因菊花的PCR验证：根据转基因载体中的35S启动子序列设计引物对筛选的转基因菊花Kan抗性株系进行PCR 扩增，验证载体片段是否插入菊花基因组。该方法简单准确，能有效地剔除大量假阳性植株，对于实现菊花转基因植株的规模化快速筛选、加快育种进程具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102841126B
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201210315398.9
申请日：2012-08-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定菊花花粉与柱头互作差异蛋白的方法，属于菊花蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培菊花作母本，野菊为父本进行菊花远缘杂交工作。授粉后1h及24h，剪下已授粉的花序；去除取得的花序中舌状花花瓣及萼片得到雌蕊。所得的雌蕊用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质样品；运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速准确鉴定菊花花粉与柱头互作过程中的关键差异蛋白，为解决菊花远缘杂交不亲和性提供研究基础。
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公开(公告)号：CN103250495B
公开(公告)日：2014-10-15
申请号：CN201310208052.3
申请日：2013-05-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01C21/00
Abstract: 本发明公开了一种建立高品质切花菊生产定量精准施氮方案的方法，属于花卉栽培领域。它包括以下步骤：a、不同施氮水平下不同时期植株性状指标与土壤含氮量的测定；b、土壤适宜含氮量的确定：对不同时期植株性状指标与土壤含氮量进行相关回归分析，通过回归方程求解得出不同生长时期土壤适宜含氮量；c、适宜施氮量的确定：对采收期植株各性状指标与施氮量进行相关回归分析，得到回归方程，通过回归方程求解得出土壤适宜施氮量。本发明没有地域限制，适合不同的土壤条件及不同品种，实用性强，且所需设备简单，所得结果可直接应用于生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103250495A
公开(公告)日：2013-08-21
申请号：CN201310208052.3
申请日：2013-05-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01C21/00
Abstract: 本发明公开了一种建立高品质切花菊生产定量精准施氮方案的方法，属于花卉栽培领域。它包括以下步骤：a、不同施氮水平下不同时期植株性状指标与土壤含氮量的测定；b、土壤适宜含氮量的确定：对不同时期植株性状指标与土壤含氮量进行相关回归分析，通过回归方程求解得出不同生长时期土壤适宜含氮量；c、适宜施氮量的确定：对采收期植株各性状指标与施氮量进行相关回归分析，得到回归方程，通过回归方程求解得出土壤适宜施氮量。本发明没有地域限制，适合不同的土壤条件及不同品种，实用性强，且所需设备简单，所得结果可直接应用于生产。
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公开(公告)号：CN102242225B
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201110203309.7
申请日：2011-07-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法，属于分子生物学的病毒检测领域，该方法包括：（1）从菊花植株取样并提取总RNA；（2）分别针对CVB和CChMVd病毒设计两对特异性引物：CVB-F，CVB-R；CChMVd-F，CChMVd-R；（3）以随机六聚体为引物进行反转录得到两种cDNA；（4）利用RT-PCR技术扩增所述cDNA，将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到665bp特异性片段表示感染CVB，得到206bp特异性片段表示感染CChMVd。本发明提供的检测方法可同时检测被CVB和CChMVd复合侵染的病株，检测特异性强，灵敏度高，工序简单，节约成本。
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公开(公告)号：CN102090342B
公开(公告)日：2013-01-16
申请号：CN201110003048.4
申请日：2011-01-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明涉及一种建立紫花野菊高效再生体系的方法，属于植物生物技术育种领域。以紫花野菊无菌苗叶片为外植体，采用两激素三水平随机区组设计的方法筛选出最佳再生培养基，诱导胚性愈伤组织，经过2-3次继代培养后分化出再生小苗，而后转入生根培养基中生根培养，获得完整植株。本发明首次针对紫花野菊建立了其高频再生体系，为紫花野菊生物技术育种工作提供了理论基础和实验依据，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN102841126A
公开(公告)日：2012-12-26
申请号：CN201210315398.9
申请日：2012-08-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定菊花花粉与柱头互作差异蛋白的方法，属于菊花蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培菊花作母本，野菊为父本进行菊花远缘杂交工作。授粉后1h及24h，剪下已授粉的花序；去除取得的花序中舌状花花瓣及萼片得到雌蕊。所得的雌蕊用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质样品；运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速准确鉴定菊花花粉与柱头互作过程中的关键差异蛋白，为解决菊花远缘杂交不亲和性提供研究基础。
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公开(公告)号：CN102676545A
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201210172706.7
申请日：2012-05-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1表达载体构建。本发明所构建的表达载体pCAMBIA 1301-CmIAA1是由CmIAA1基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector，经BamH I和Xba I双酶切后连接到载体pCAMBIA 1301的BamH I和Xba I位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmIAA1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成Aux/IAA蛋白，影响生长素信号途径，对植物生长发育产生负调控作用，抑制植物主根伸长，促使侧根增多，并抑制植物整体生长进度。
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