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公开(公告)号：CN118165990A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410588735.4
申请日：2024-05-13
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明公开了基于PRRSV基因组dsRNA的siRNA重组质粒及其构建方法和应用。通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组产生的siRNA基因片段进行测序分析，获得能够大量产生siRNA的片段，将得到的基因片段构建至真核表达载体质粒，制备重组质粒及其在猪繁殖与呼吸综合征的防治方面的应用，经实验证明，将重组质粒转染猪肺泡巨噬细胞后感染PRRSV，细胞中PRRSV复制量显著降低，PRRSV病毒的增殖被抑制。在使用仔猪进行的攻毒保护实验中，免疫组实验猪血液中具有更低的病毒载量，且实验组仔猪全部存活，攻毒对照组有实验猪死亡。因此，该重组质粒可作为种猪场净化PRRSV的候选物。
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公开(公告)号：CN114672477B
公开(公告)日：2023-05-30
申请号：CN202210135772.0
申请日：2022-02-14
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C12N9/64 , C12N15/57 , C12N15/85 , C12N5/10 , A61K38/48 , A61P31/14 , A23K20/189 , A23K50/30
摘要： 本发明公开了钙蛋白酶‑1（Calpain‑1）及其抑制猪流行性腹泻病毒感染方面的应用，属于生物工程技术领域。本发明在发现猪小肠黏液总蛋白能抑制PEDV感染的基础上，从猪小肠黏液中鉴定并纯化得到一种能够抑制PEDV侵入宿主细胞的蛋白酶‑1，该蛋白编码基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明进一步通过真核表达获得的猪源钙蛋白酶‑1同样具有显著的抗病毒功能，其主要通过酶解PEDV刺突蛋白抑制PEDV入侵宿主细胞。本发明所述的钙蛋白酶‑1还可以应用于抗PEDV感染药物或抗病毒饲料添加剂的制备。
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公开(公告)号：CN108265073B
公开(公告)日：2022-06-21
申请号：CN201710012140.4
申请日：2017-01-03
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及表达肠道M样细胞靶向肽(L‑lectin‑β‑GF)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组枯草芽孢杆菌(B.S.‑RCL)，属于生物技术基因工程领域。本发明成功构建了表达L‑lectin‑β‑GF和PEDV S蛋白的重组枯草芽孢杆菌表达质粒pHT43‑RCL，并成功电击转化入枯草芽孢杆菌WB800N菌株。经Western‑blot验证L‑lectin‑β‑GF和PEDV S蛋白在重组枯草芽孢杆菌内可以被成功表达。体内试验证明该重组枯草芽孢杆菌可以有效的靶向肠道M样细胞，口服免疫可以刺激小鼠机体产生更高水平的PEDV特异性免疫应答水平。重组枯草芽孢杆菌(B.S.‑RCL)有望开发成增强型黏膜免疫递送载体并且开发成预防猪流行性腹泻的基因工程口服疫苗。
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公开(公告)号：CN113621598A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202111053676.3
申请日：2021-09-08
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C12N9/64 , C12N15/57 , C12N15/85 , C12N5/10 , A61K38/48 , A61P31/14 , A23K20/189 , A23K50/30
摘要： 本发明公开了钙蛋白酶‑1（Calpain‑1）及其抑制猪流行性腹泻病毒感染方面的应用，属于生物工程技术领域。本发明在发现猪小肠黏液总蛋白能抑制PEDV感染的基础上，从猪小肠黏液中鉴定并纯化得到一种能够抑制PEDV侵入宿主细胞的蛋白酶‑1，该蛋白编码基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明进一步通过真核表达获得的猪源钙蛋白酶‑1同样具有显著的抗病毒功能，其主要通过酶解PEDV刺突蛋白抑制PEDV入侵宿主细胞。本发明所述的钙蛋白酶‑1还可以应用于抗PEDV感染药物或抗病毒饲料添加剂的制备。
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公开(公告)号：CN105838731B
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201610159897.1
申请日：2016-03-17
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及能够合成30个碳原子(C30)的类胡萝卜素4，4′‑二脱辅基链孢红素(4，4’‑diaponeurosporene)重组枯草芽孢杆菌，属于生物技术基因工程领域。本发明成功构建了含有C30类胡萝卜素合成酶基因(crtm和crtn)的枯草芽孢杆菌表达质粒pMK3‑crtmn(能够在枯草芽孢杆菌中表达C30类胡萝卜素合成酶Crtm和Crtn)，并成功电击转化入枯草芽孢杆菌WB800中。转化后的WB800菌体由原来的白色变为黄色。提取重组WB800中的色素成分经高效液相色谱(HPLC)鉴定为4，4′‑二脱辅基链孢红素。4，4′‑二脱辅基链孢红素能够刺激树突状细胞成熟，产生的细胞因子(IL‑6、IL‑10、IL‑12p70和TNFα)量增加，并且具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力。口服能够合成4，4′‑二脱辅基链孢红素的枯草芽孢杆菌可以显著降低葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎症状。这种能产4，4′‑二脱辅基链孢红素的枯草芽孢杆菌有望开发成为一种预防结肠炎的益生菌。
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公开(公告)号：CN109856387A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201910065715.8
申请日：2019-01-23
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： G01N33/535 , G01N33/569
摘要： 本发明公开猪流行性腹泻特异性SIgA抗体ELISA检测试剂盒及其应用，检测试剂盒包括重组蛋白S1D。本发明还公开基于S1D蛋白检测鼻液和唾液中猪流行性腹泻病毒SIgA的间接ELISA方法，通过基因克隆表达技术成功构建重组质粒，蛋白纯化亲和层析技术获取猪流行性腹泻病毒S1D蛋白，以S1D蛋白为包被抗原建立间接ELISA检测黏液中猪流行性腹泻病毒SIgA抗体方法。可用于猪群中猪流行性腹泻病毒特异性SIgA抗体检测，判断猪群中猪流行性腹泻病毒特异性SIgA抗体水平。该方法具有较好的特异性和敏感性，可应用于猪流行性腹泻病毒SIgA抗体的临床检测及黏膜免疫评价。本发明操作简单，应用范围广。
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公开(公告)号：CN108265073A
公开(公告)日：2018-07-10
申请号：CN201710012140.4
申请日：2017-01-03
申请人： 南京农业大学
CPC分类号： C12N15/75 , A61K49/0008 , C07K14/005 , C07K14/31 , C12N15/65 , C12N2770/20022
摘要： 本发明涉及表达肠道M样细胞靶向肽(L-lectin-β-GF)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组枯草芽孢杆菌(B.S.-RCL)，属于生物技术基因工程领域。本发明成功构建了表达L-lectin-β-GF和PEDV S蛋白的重组枯草芽孢杆菌表达质粒pHT43-RCL，并成功电击转化入枯草芽孢杆菌WB800N菌株。经Western-blot验证L-lectin-β-GF和PEDV S蛋白在重组枯草芽孢杆菌内可以被成功表达。体内试验证明该重组枯草芽孢杆菌可以有效的靶向肠道M样细胞，口服免疫可以刺激小鼠机体产生更高水平的PEDV特异性免疫应答水平。重组枯草芽孢杆菌(B.S.-RCL)有望开发成增强型黏膜免疫递送载体并且开发成预防猪流行性腹泻的基因工程口服疫苗。
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公开(公告)号：CN105886523A
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201410833720.6
申请日：2014-12-25
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组枯草芽孢杆菌，属于生物技术基因工程领域。本发明成功构建了猪传染性胃肠炎病毒S蛋白重组枯草芽孢杆菌整合表达质粒pIncotGSR，并成功电击转化入枯草芽孢杆菌WB800。经Western-blot验证猪传染性胃肠炎病毒S蛋白在重组枯草芽孢杆菌内可以被成功表达。口服免疫可以刺激一月龄仔猪机体产生有效的TGEV特异性免疫应答水平。重组枯草芽孢杆菌有望开发成预防猪传染性胃肠炎的基因工程口服疫苗。
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公开(公告)号：CN105838731A
公开(公告)日：2016-08-10
申请号：CN201610159897.1
申请日：2016-03-17
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及能够合成30个碳原子(C30)的类胡萝卜素4，4′?二脱辅基链孢红素(4，4’?diaponeurosporene)重组枯草芽孢杆菌，属于生物技术基因工程领域。本发明成功构建了含有C30类胡萝卜素合成酶基因(crtm和crtn)的枯草芽孢杆菌表达质粒pMK3?crtmn(能够在枯草芽孢杆菌中表达C30类胡萝卜素合成酶Crtm和Crtn)，并成功电击转化入枯草芽孢杆菌WB800中。转化后的WB800菌体由原来的白色变为黄色。提取重组WB800中的色素成分经高效液相色谱(HPLC)鉴定为4，4′?二脱辅基链孢红素。4，4′?二脱辅基链孢红素能够刺激树突状细胞成熟，产生的细胞因子(IL?6、IL?10、IL?12p70和TNFα)量增加，并且具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力。口服能够合成4，4′?二脱辅基链孢红素的枯草芽孢杆菌可以显著降低葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎症状。这种能产4，4′?二脱辅基链孢红素的枯草芽孢杆菌有望开发成为一种预防结肠炎的益生菌。
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