一种由特异核苷酸序列引导的缺刻酶介导的DNA组装载体及其应用

    公开(公告)号:CN114990144A

    公开(公告)日:2022-09-02

    申请号:CN202210521633.1

    申请日:2022-05-13

    Abstract: 本发明公开了一种由特异核苷酸序列引导的缺刻酶介导的DNA组装载体及其应用。本发明所述DNA组装载体包含一个由特异核苷酸序列、具有筛选标记功能的基因表达盒和缺刻酶位点组成的一种由特异核苷酸序列引导的缺刻酶组装元件(UNiE),可用于长片段DNA克隆和多基因片段的高效组装。本发明同时将UNiE元件与多基因叠加系统(TGSII)相结合,构建了一个组装效率更高的新型多基因叠加系统(TGSII‑UNiE),实现了对多基因的高效组装,具有效率高、操作简便和成本低的特点。

    优化的玉米rZmG2基因及其在提高植物遗传转化效率中的应用

    公开(公告)号:CN114736912A

    公开(公告)日:2022-07-12

    申请号:CN202210296049.0

    申请日:2022-03-24

    Abstract: 本发明公开了经密码子优化的玉米rZmG2基因及其在提高植物遗传转化效率中的应用,并基于此提供了一种提高植物遗传转化效率的技术体系,包括含有所述优化rZmG2基因的重组载体、表达盒或重组菌在提高植物转化效率的应用。本发明同时提供了包含rZmG2基因的热激诱导的自删除载体结构,其为基于Cre/loxP的基因删除重组载体、表达盒或重组菌,用于删除转基因植株中的rZmG2基因和潮霉素筛选标记,或其他外源基因和筛选标记。本发明将优化的rZmG2基因通过植物表达载体以基因工程手段整合到植物染色体上,能显著提高植物的遗传转化效率。且利用本发明技术体系获得的转基因植株,可通过热激诱导的Cre/loxp基因删除系统自动删除rZmG2基因和筛选标记基因,从而避免转基因对植株后续生长发育的可能影响。

    一种愈伤组织特异启动子Pcsp及其应用

    公开(公告)号:CN114657179A

    公开(公告)日:2022-06-24

    申请号:CN202210181702.9

    申请日:2022-02-25

    Abstract: 本发明提供了一种愈伤组织特异强启动子Pcsp,涉及植物生物技术及基因工程领域。本发明成功分离并克隆了一种愈伤组织特异强启动子Pcsp,克服了现有技术利用组成型启动子驱动标记基因,表达活性不高或特异性较低的不足。本发明还提供了在本启动子Pcsp的应用。该Pcsp启动子可以用来构建植物遗传转化和基因编辑载体,可以驱动标记基因、Cas核酸酶编码基因或特定功能基因在愈伤组织中特异高水平表达,表达水平约为组成型启动子P35S所驱动GUS的4倍;不影响转基因阳性植株正常生长的情况下,在植株组织器官中不表达,具有特异性,更安全,可解决生物安全方面的担忧;在基因编辑实验中周期短、成本低、灵敏度高,在植物遗传转化和基因工程领域具有很好的应用前景。

    一种高效的植物广靶向腺嘌呤单碱基编辑器及其构建与应用

    公开(公告)号:CN114524879A

    公开(公告)日:2022-05-24

    申请号:CN202111603075.5

    申请日:2021-12-24

    Abstract: 本发明公开了一种高效的植物广靶向腺嘌呤单碱基编辑器及其构建与应用。所述腺嘌呤单碱基编辑器包含水稻密码子序列偏好性优化的核酸序列编码的SpCas9变体融合蛋白TadA8e‑DBD‑SpRY(hyABE8e‑SpRY),从N端到C端,依次核定位信号bpNLS,脱氨酶TadA8e,DNA单链结合域DBD,SpCas9缺刻酶变体SpRYn,以及核定位信号bpNLS。相比现有植物腺嘌呤单碱基编辑器,本发明构建的腺嘌呤单碱基编辑器具有高效、广靶向识别几乎所有NNN‑PAM、更宽的编辑窗口、无靶序列偏好性、可检测的自靶向sgRNA效应、以及脱靶效率低的特点。

    一种植物高效胞嘧啶单碱基编辑器及其构建与应用

    公开(公告)号:CN112266420A

    公开(公告)日:2021-01-26

    申请号:CN202011189809.5

    申请日:2020-10-30

    Abstract: 本发明提供了一种植物高效胞嘧啶单碱基编辑器及其构建与应用。该编辑器包含SpCas9变体融合蛋白PeCBE‑NG,从N端到C端,依次包含1个核定位bpNLS功能元件,1个脱氨酶eCBE功能元件,1个SpCas9变体Cas9n‑NG编码序列,2个串联的尿嘧啶糖基化酶抑制蛋白UGI功能元件,以及1个核定位bpNLS功能元件。相比现有植物胞嘧啶单碱基编辑器,本发明构建的胞嘧啶单碱基编辑器具有高效、无靶序列偏好性、编辑窗口适中、自靶向sgRNA效率低、脱靶效率低、以及广靶向识别NG‑PAM的特点,将有利于植物基因功能研究和作物遗传改良的发展,在植物单碱基替换与饱和突变筛选等方面具有广泛的应用前景。

    一种短小型小核RNA启动子及其构建方法和在基因组编辑中的应用

    公开(公告)号:CN111019946B

    公开(公告)日:2020-12-11

    申请号:CN201911338845.0

    申请日:2019-12-23

    Abstract: 本发明提供了一种短小型小核RNA启动子及其构建方法和应用。所述短小型小核RNA启动子的长度为150‑300bp,3’端至5’端方向依次含有1个TATA box保守元件,1个USE保守元件,以及至少一个MSP保守元件。相比现有野生型小核RNA基因启动子,本发明所构建的短小型小核RNA启动子转录活性更强,具有明显更高的驱动sgRNA的编辑效率,而且长度较短,可以减少每个sgRNA表达盒的长度,提高多靶点sgRNA克隆构建载体的效率,利于进行多靶点多基因的同时编辑,在基因组编辑方面具有很好的应用前景。

    一种多基因组装载体系统及其多基因组装方法

    公开(公告)号:CN107177616A

    公开(公告)日:2017-09-19

    申请号:CN201710384197.7

    申请日:2017-05-26

    Inventor: 刘耀光 祝钦泷

    Abstract: 本发明公开了一种多基因组装载体系统及其多基因组装方法。该系统包括1类接受载体、2类供给载体、以及可选择使用的能发生筛选标记自删除的供给质粒。该系统利用Cre/loxP重组系统和两组突变型loxP的不可逆重组位点,在Cre酶作用下,以野生型loxP位点的重组来实现供给载体整合到接受载体中,然后其一组突变型loxP的不可逆重组自动删除供给载体的骨架,只留下目的基因在接受载体上;重复2类供给载体交替与接受载体的组装,就能实现多基因的快速组装。本发明是目前最简单高效的多基因载体系统。因此本发明对重要的、复杂生物合成途径和重要农艺性状的多基因遗传工程操作提供了可操作的技术平台,具有重要的应用价值。

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