公开(公告)号：CN103160515B

公开(公告)日：2015-09-30

申请号：CN201110420334.0

申请日：2011-12-15

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙远明 ,  董洁娴 ,  王弘 ,  雷红涛 ,  李振峰 ,  徐振林 ,  杨金易 ,  沈玉栋

IPC: C12N15/13 ,  C12N15/63 ,  C12N5/20 ,  C07K16/00 ,  C07K16/44

Abstract: 本发明公开了一种基于杂交瘤细胞的单链抗体的制备方法。本发明的制备方法，步骤为：以杂交瘤细胞总mRNA为模板反转录得cDNA，选用简并性低的通用引物扩增全套抗体重链可变区和轻链可变区基因；将扩增出的重、轻链可变区基因序列输入IMGT数据库进行分析，排除来源瘤细胞的抗体基因和无义基因，得到候选重链和轻链可变区基因；将该基因翻译成氨基酸序列后进行三维结构同源模建，获得单链抗体的三维模拟结构，与相应抗原靶标分子进行分子对接分析；分析结果正确的候选重链和轻链通过重叠延伸PCR法拼接成单链抗体基因，进行表达及抗体活性鉴定。本发明的制备方法适合所有源于单克隆杂交瘤细胞的单链抗体制备，过程简易、快速，产品质量高。

公开(公告)号：CN104897748A

公开(公告)日：2015-09-09

申请号：CN201510287384.4

申请日：2015-05-29

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 徐振林 ,  孙远明 ,  董秀秀 ,  梁祖培 ,  沈玉栋 ,  杨金易 ,  王弘 ,  雷红涛

IPC: G01N27/26 ,  G01N27/30 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明属于生物传感器技术领域，具体公开了一种检测组胺的可抛式一步电沉积免疫生物传感器及其制备方法。本发明免疫生物传感器采用表面有普鲁士蓝-壳聚糖-纳米金复合膜的电极，所述电极上固定有组胺包被原；其中，复合膜中纳米金与普鲁士蓝的摩尔浓度比为1:2000~1:20，壳聚糖的质量体积含量为0.01~0.05%。并且，采用一步沉积电极的方式使电极表面获得复合膜，沉积步骤比传统高分子聚合物修饰电极制备步骤简便，且更容易暴露抗原结合位点。本发明免疫生物传感器将竞争免疫反应和生物传感器相结合，并可根据需要得到组胺检测工作曲线等一系列性能表征，具有操作简单、灵敏度高、快速方便等优势，可用于样品中组胺的现场快速检测。

公开(公告)号：CN104119277A

公开(公告)日：2014-10-29

申请号：CN201410338095.8

申请日：2014-07-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙远明 ,  罗林 ,  徐振林 ,  沈玉栋 ,  王弘 ,  雷红涛 ,  杨金易 ,  肖治理

IPC: C07D233/64 ,  C07K1/107 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/06 ,  C07K16/18 ,  G01N33/535

CPC classification number: C07D233/64 ,  C07K1/1077 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/18 ,  C07K19/00 ,  G01N33/554

Abstract: 本发明属于食品安全免疫检测技术领域，具体公开了一种直接针对组胺的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用。所述半抗原的分子结构如（Ⅰ）所示：；其中，n=0～6。由上述半抗原与载体蛋白结合获得人工抗原，由上述人工抗原免疫动物获得的抗体能直接识别组胺，对其他结构类似物均不存在明显的交叉反应；基于此抗体建立的组胺免疫分析方法，较之前报道的间接衍生的方法，省去了对样品进行前处理的衍生步骤，节省有机试剂的消耗和分析时间，降低检测成本。所得多克隆抗体的效价为1：64000，半抑制浓度为56.3mg/L，其组胺的最低检测限可达25.8mg/L低于各国规定的限量标准。

公开(公告)号：CN103822913A

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201410066333.4

申请日：2014-02-26

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 杨金易 ,  沈玉栋 ,  孙远明 ,  柳春红 ,  羿利华 ,  雷红涛 ,  徐振林 ,  王弘 ,  肖治理

IPC: G01N21/76 ,  G01N33/535 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种邻苯二甲酸二丁酯的化学发光酶联免疫试剂盒及其使用方法。该试剂盒包括包被有邻苯二甲酸二丁酯抗原的化学发光酶标板、辣根过氧化物酶标记的邻苯二甲酸二丁酯酶标抗体、邻苯二甲酸二丁酯标准品溶液、化学发光液、浓缩洗涤液。本发明还公开了利用所述试剂盒检测邻苯二甲酸二丁酯残留的方法。本发明提供的检测邻苯二甲酸二丁酯的试剂盒采用直接竞争化学发光酶联免疫吸附分析技术，最大检测范围为0.075～1.52ng/mL，灵敏度为0.286ng/mL，检出限为0.039ng/mL，回收率为79.2～110.6%，检出限低、灵敏度高、稳定性好，成本低，非常适合大量样品的筛查，具有重要的实际应用推广意义。

公开(公告)号：CN103487575A

公开(公告)日：2014-01-01

申请号：CN201310391949.4

申请日：2013-09-02

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 杨金易 ,  张燕 ,  王弘 ,  孙远明 ,  雷红涛 ,  沈玉栋 ,  徐振林 ,  李萍

IPC: G01N33/558 ,  G01N21/76

CPC classification number: G01N33/5308 ,  G01N21/76 ,  G01N33/54393 ,  G01N2333/37

Abstract: 本发明公开了一种细交链孢菌酮酸的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法，属于化学发光酶联免疫检测技术领域。该检测试剂盒采用间接竞争法，试剂盒包括包被有细交链孢菌酮酸抗原的化学发光酶标板，细交链孢菌酮酸标准品，细交链孢菌酮酸抗体，酶标抗抗体，化学发光液和洗涤液。该试剂盒的使用方法包括如下步骤：（1）待测样品的前处理；（2）顺序加入细交链孢菌酮酸标准品溶液或样品、细交链孢菌酮酸抗体，竞争反应后加入酶标抗抗体，最后加入化学发光液通过化学发光免疫分析仪进行细交链孢菌酮酸的定量检测；（3）结果处理与分析。本发明提供的检测试剂盒灵敏度高、稳定性好，适合大量样品的筛查，具有重要的实际应用推广意义。

公开(公告)号：CN101995460B

公开(公告)日：2013-12-25

申请号：CN201010268992.8

申请日：2010-08-31

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙远明 ,  徐振林 ,  王弘 ,  雷红涛 ,  李丽华 ,  沈玉栋 ,  杨金易 ,  李振峰

IPC: G01N33/543 ,  G01N33/577 ,  G01N1/28 ,  C07K16/44 ,  C07K16/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供了一种莱克多巴胺残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法。本发明所述试剂盒包被有莱克多巴胺抗原的酶标板，镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体、莱克多巴胺抗体等。本发明还公开了应用上述试剂盒检测莱克多巴胺残留的方法。本发明提供的检测莱克多巴胺的试剂盒采用间接竞争时间分辨免疫分析技术，灵敏度高、稳定性好，大大简化了操作步骤和反应时间，减少了因操作复杂引起的误差，降低了成本，非常适合大量样品的筛查，具有重要的现实意义。

公开(公告)号：CN103351433A

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201310197528.8

申请日：2013-05-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙远明 ,  沈玉栋 ,  王弘 ,  罗林 ,  徐振林 ,  杨金易 ,  雷红涛 ,  肖治理

IPC: C07K14/795 ,  C07K14/77 ,  C07K16/00 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及食品安全领域，具体涉及一种苯甲酸人工抗原和抗体及其制备方法与应用。所述苯甲酸人工抗原具有式（Ⅰ）所示分子结构：。所述苯甲酸人工抗原是将对氨基苯甲酸作为半抗原与载体蛋白通过重氮化法偶联制备得到的。采用本发明人工抗原得到的抗血清的效价可达到1:32000，最低检测限为0.71ng/mL，半抑制浓度为3.34ng/mL，产生的抗体的特异性高、灵敏度高、准确度高，为建立快速、准确、灵敏的苯甲酸免疫检测方法奠定了基础。

公开(公告)号：CN103288741A

公开(公告)日：2013-09-11

申请号：CN201310197597.9

申请日：2013-05-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 徐振林 ,  孙远明 ,  罗林 ,  沈玉栋 ,  肖治理 ,  杨金易 ,  雷红涛 ,  王弘

IPC: C07D233/64 ,  C07K14/77 ,  C07K14/765 ,  C07K1/107 ,  C07K16/44 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种组胺半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法与应用。所述组胺半抗原具有式（Ⅰ）或式（Ⅱ）所示分子结构：；其中，n=0～6，Y=COOH、NO2。所述组胺人工抗原具有式（Ⅲ）或式（Ⅳ）所示分子结构：；其中，n=0～6。采用本发明抗原得到的抗血清的效价可达到1×107，最低检测限为0.13ng/mL，半抑制浓度为7.6ng/mL，产生的抗体的特异性高、灵敏度高、准确度高，本发明中组胺衍生物制备方法简单高效，重复性高，为建立快速、准确、灵敏的组胺免疫检测方法奠定了基础。

公开(公告)号：CN101987836B

公开(公告)日：2012-11-07

申请号：CN201010268994.7

申请日：2010-08-31

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙远明 ,  沈玉栋 ,  徐振林 ,  王弘 ,  肖犇 ,  雷红涛 ,  杨金易

IPC: C07D279/34 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/566 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明提供了一种氯丙嗪半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。所述氯丙嗪人工半抗原具有式(I)所示分子结构：所述氯丙嗪人工抗原具有式(II)或(III)所示分子结构：采用本发明抗原得到的抗血清的效价可达1∶3×105，最低检测限为3ng/mL，半抑制浓度为29ng/mL，产生的抗体的特异性高、灵敏度高、准确度高，本发明的抗原及抗体在食品中氯丙嗪的残留检测上具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN101463086B

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN200910036527.9

申请日：2009-01-09

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙远明 ,  徐振林 ,  沈玉栋 ,  雷红涛 ,  谢桂勉 ,  王弘 ,  杨金易

IPC: C07K16/44 ,  C07K16/06 ,  C07K14/765 ,  C07F9/18 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体及其制备方法和应用。本发明所述抗体是通过在二乙氧基硫代磷酸酯结构上引入合适的活性手臂，制备免疫半抗原，半抗原偶联牛血清蛋白制备免疫抗原，免疫原免疫新西兰大白兔制备得到，并与包被原建立二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药多残留ELISA检测方法。基于本发明所述抗体建立的检测方法可以同时检测二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药12种以上，检测限为0.0002～3.938μg/mL，适合农残的现场监控和高通量快速筛选。