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公开(公告)号：CN1858246A
公开(公告)日：2006-11-08
申请号：CN200610009840.X
申请日：2006-03-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种口蹄疫病毒RT－PCR检测和分型方法。本方法通过引物P1/P2和S1/S2可以对口蹄疫病毒进行检测；通过引物S1/S2的PCR产物核苷酸同源性比较进行口蹄疫病毒血清型鉴定。本方法检测过程包括：(1)设计特异检测口蹄疫病毒的引物P1/P2和S1/S2；(2)提取口蹄疫病毒的RNA；(3)以提取的RNA为模板，利用反转录引物，在反转录酶的作用下合成cDNA；(4)利用PCR技术进行口蹄疫病毒的核酸扩增；(5)将引物S1/S2的PCR产物克隆到pMD18－T载体，进行核苷酸序列测定，然后利用生物学软件通过核苷酸同源性比较进行血清型鉴定。用本发明的方法检测口蹄疫病毒和分型的快速、稳定性好、灵敏度高、特异性强、无散毒危险。
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公开(公告)号：CN1818651A
公开(公告)日：2006-08-16
申请号：CN200610009804.3
申请日：2006-03-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/53 , G01N33/535 , G01N21/78
Abstract: 本发明提供的是兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)辣根过氧化物酶标记抗体及其制备方法。本发明辣根过氧化物酶标记兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体是利用盐析、层析等蛋白纯化技术和酶标记技术，在提纯鹅卵黄免疫球蛋白的基础上，免疫家兔制备并纯化兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体，再通过改良过碘酸钠法将其与辣根过氧化物酶结合，并采用盐析及Sephodex G200纯化，从而制备辣根过氧化物酶标记兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体。应用此酶标记抗体可以建立多种鹅类疫病检测技术，预防鹅类多种传染病。
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公开(公告)号：CN104371013B
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201410549030.8
申请日：2014-10-16
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/35 , C07K19/00 , C12N15/31 , G01N33/68 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了牛分枝杆菌CFP‑10的迟发型变态反应抗原表位多肽及其应用。本发明利用重叠短肽分段表达技术,对CFP‑10进行迟发型变态反应抗原肽的鉴定,最终鉴定出具有迟发型变态反应性的抗原肽为C‑P和C‑P。将鉴定出的抗原肽C‑P和C‑P与M‑P通过基因工程手段以Linker进行连接,基因优化后获得串联肽基因CCM,同时构建了含有多个CCM的多拷贝串联肽基因。对鉴定出的抗原肽及串联肽进行迟发型变态反应鉴定,结果显示,C‑P、C‑P、CCM、2CCM均能产生较强的迟发型变态反应。本发明的提出改善了结核菌素皮内试验(TST)法诊断中PPD特异性差的问题,此外,通过增加串联肽的种类提高了诊断的敏感性。因此,本发明为牛结核皮试诊断制剂的研制提出了新的思路,具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN103450355B
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201310381419.1
申请日：2013-08-28
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及重组牛alpha干扰素，其相应的基因为牛共有IFN-α基因（CoBoIFN-α）、遗传密码子优化的牛共有IFN-α基因（Y-CoBoIFN-α）和遗传密码子优化的牛IFN-αG亚型基因（Y-BoIFN-αG），以及编码的蛋白在抗病毒方面的生物活性。本发明首次设计并合成了CoBoIFN-α基因，并首次鉴定了CoBoIFN-α和BoIFN-αG的抗病毒活性，结果证实BoIFN-α-G和CoBoIFN-α的抗病毒活性至少高于其他同类十倍，更适于临床应用与工业化开发。
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公开(公告)号：CN103450355A
公开(公告)日：2013-12-18
申请号：CN201310381419.1
申请日：2013-08-28
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及重组牛alpha干扰素，其相应的基因为牛共有IFN-α基因（CoBoIFN-α）、遗传密码子优化的牛共有IFN-α基因（Y-CoBoIFN-α）和遗传密码子优化的牛IFN-αG亚型基因（Y-BoIFN-αG），以及编码的蛋白在抗病毒方面的生物活性。本发明首次设计并合成了CoBoIFN-α基因，并首次鉴定了CoBoIFN-α和BoIFN-αG的抗病毒活性，结果证实BoIFN-α-G和CoBoIFN-α的抗病毒活性至少高于其他同类十倍，更适于临床应用与工业化开发。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102121013A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN200910073285.0
申请日：2009-11-27
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 可高效表达的成熟鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法，它涉及鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低，以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。可高效表达的成熟鸡α干扰素基因的序列见SEQ ID NO：1。方法：一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子，经合成得优化后的鸡α干扰素基因；二、克隆到表达载体中，然后转化到大肠杆菌感受态细胞中，经筛选后诱导表达，离心后得湿菌，再进行包涵体的提取和溶解；三、进行复性及纯化，收集蛋白。本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达，表达量可达总菌体蛋白的30％，复性效果好。
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公开(公告)号：CN101870980A
公开(公告)日：2010-10-27
申请号：CN201010175292.4
申请日：2010-05-18
Applicant: 东北农业大学
Abstract: Asia 1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法，它涉及口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法。它解决了现有灭活疫苗纯化过程中很难监测，所以残留的非结构蛋白会干扰对自然感染动物的诊断，诊断的准确性低的问题。序列见SEQ ID NO：1。方法：1.从pBSAs全长重组质粒中克隆3A14L和3A14R，得到3A14L PCR产物和3A14R PCR产物，然后融合PCR回收融合产物；2.双酶切pBSAs全长重组质粒和融合产物，再连接并构建重组质粒pBSAs-3A14D即完成。本发明中缺失3A非结构蛋白的一部分，不会残留此部分的非结构蛋白，诊断的准确性高。
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公开(公告)号：CN1818651B
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200610009804.3
申请日：2006-03-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/53 , G01N33/535 , G01N21/78
Abstract: 本发明提供的是兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)辣根过氧化物酶标记抗体及其制备方法。本发明辣根过氧化物酶标记兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体是利用盐析、层析等蛋白纯化技术和酶标记技术，在提纯鹅卵黄免疫球蛋白的基础上，免疫家兔制备并纯化兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体，再通过改良过碘酸钠法将其与辣根过氧化物酶结合，并采用盐析及Sephodex G200纯化，从而制备辣根过氧化物酶标记兔抗鹅IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体。应用此酶标记抗体可以建立多种鹅类疫病检测技术，预防鹅类多种传染病。
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公开(公告)号：CN1317563C
公开(公告)日：2007-05-23
申请号：CN200410043811.6
申请日：2004-08-18
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , C12Q1/68 , C07K14/005
Abstract: 本发明提供的是一种检测鹅细小病毒抗体的重组原核表达蛋白抗原及其制备方法。本产品制备过程包括：(1)设计扩增GPV-VP3基因的特异性引物；(2)通过PCR扩增获得VP3基因片段；(3)对VP3基因进行克隆、测序鉴定；(4)将VP3基因定向亚克隆至pGEX-6p-1原核表达载体；(5)VP3基因在大肠杆菌的诱导表达；(6)VP3基因表达蛋白的亲合层析纯化。本产品可作为检测鹅细小病毒抗体的间接-ELISA及Dot-ELISA方法的检测抗原，也可作为预防鹅细小病毒感染的基因工程亚单位疫苗。
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公开(公告)号：CN1821397A
公开(公告)日：2006-08-23
申请号：CN200510127371.7
申请日：2005-12-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是鹅重组I、II型干扰素的制备方法。通过RT－PCR扩增编码鹅IFN－α成熟蛋白及编码IFN－γ成熟蛋白基因，对基因序列分别测序鉴定，将目的基因分别定向亚克隆至pET30a原核表达载体，分别在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中，进行诱导表达，并对融合表达的目的蛋白分别进行亲合层析纯化、分别定向亚克隆至pBlueBacHis2A和pMel BacA杆状病毒转移载体，转移载体与线性化的杆状病毒DNA分别共转染昆虫细胞Sf9，重组病毒感染昆虫细胞，真核表达系统表达鹅mIFN－α与mIFN－γ。本方法得到的产品可作为鹅用抗病毒性疫病的药物及免疫佐剂增强鹅用疫苗的免疫效力。
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