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公开(公告)号:CN104231071A
公开(公告)日:2014-12-24
申请号:CN201410317401.X
申请日:2014-07-04
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/705 , C12N15/12 , C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , G01N33/569
CPC classification number: C07K14/7051 , C07K16/2809 , G01N33/56966
Abstract: 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因,根据GoCD3ε胞外区基因特点,设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外区基因(CD3εex),采用大肠杆菌表达鹅CD3εex。以含有CD3εex的重组质粒为免疫原,免疫BALB/c小鼠,重组蛋白rGoCD3ε加强免疫,获得1株稳定分泌鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3C11)。该单克隆抗体能与纯化的重组蛋白rGoCD3反应,同时能够与分离的鹅外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此,本发明的提出为检测鹅中CD3+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号:CN102121013A
公开(公告)日:2011-07-13
申请号:CN200910073285.0
申请日:2009-11-27
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 可高效表达的成熟鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法,它涉及鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低,以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。可高效表达的成熟鸡α干扰素基因的序列见SEQ ID NO:1。方法:一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子,经合成得优化后的鸡α干扰素基因;二、克隆到表达载体中,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中,经筛选后诱导表达,离心后得湿菌,再进行包涵体的提取和溶解;三、进行复性及纯化,收集蛋白。本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达,表达量可达总菌体蛋白的30%,复性效果好。
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公开(公告)号:CN104231071B
公开(公告)日:2017-10-24
申请号:CN201410317401.X
申请日:2014-07-04
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/705 , C12N15/12 , C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因,根据GoCD3ε胞外区基因特点,设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外区基因(CD3εex),采用大肠杆菌表达鹅CD3εex。以含有CD3εex的重组质粒为免疫原,免疫BALB/c小鼠,重组蛋白rGoCD3ε加强免疫,获得1株稳定分泌鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3C11)。该单克隆抗体能与纯化的重组蛋白rGoCD3反应,同时能够与分离的鹅外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此,本发明的提出为检测鹅中CD3+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号:CN102121013B
公开(公告)日:2013-01-09
申请号:CN200910073285.0
申请日:2009-11-27
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 可高效表达的成熟鸡α干扰素多肽的制备方法,它涉及鸡α干扰素多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低,以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。方法:一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子,经合成得优化后的鸡α干扰素基因;二、克隆到表达载体中,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中,经筛选后诱导表达,离心后得湿菌,再进行包涵体的提取和溶解;三、进行复性及纯化,收集蛋白。本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达,表达量可达总菌体蛋白的30%,复性效果好。
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