一种提高表达文库阳性率的建库方法

    公开(公告)号:CN109837594A

    公开(公告)日:2019-06-04

    申请号:CN201711220100.5

    申请日:2017-11-27

    Inventor: 王树伟 赵仕兰

    Abstract: 一种能够提高表达文库阳性率的文库构建方案。它通过在mRNA反转录5’引物序列中添加不同数量的A实现一个mRNA具有三种读码框,保证其中一种可进行正确翻译的反转录方案。此方案获得的cDNA无论后续进行酵母文库构建还是连接到蛋白表达载体上,均可提高mRNA正确表达蛋白的阳性率,更真实的反应样本的实际状态。

    一种适用于单细胞测序的小鼠视网膜冰冻组织细胞核悬液及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN114015752A

    公开(公告)日:2022-02-08

    申请号:CN202111248805.4

    申请日:2021-10-26

    Abstract: 本发明公开了一种小鼠视网膜组织单细胞测序细胞核悬液的制备方法,所述方法包括:配置细胞核裂解液、细胞核洗涤缓冲液、碘克沙醇‑蔗糖溶液1、碘克沙醇‑蔗糖溶液2,并置于冰上预冷;将小鼠视网膜冰冻组织取出至置于冰上的培养皿中,用预冷的PBS洗涤后,转移至离心管中;离心管埋于冰中,加入细胞核裂解液,使用电动匀浆破碎组织并孵育;使用细胞筛进行过滤至新的离心管中,离心弃上清;使用碘克沙醇‑蔗糖溶液进行密度梯度离心;向细胞核沉淀中加入细胞核洗涤缓冲液,离心弃上清;用细胞核洗涤缓冲液重悬沉淀,吸取单细胞核进行镜检细胞核浓度、细胞核碎片比例及细胞核结团比例。本发明还公开了上述制备方法在单细胞转录组测序中的应用。

    一种适用于单细胞测序的低温解离试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN113604539A

    公开(公告)日:2021-11-05

    申请号:CN202110901060.0

    申请日:2021-08-06

    Abstract: 本发明公开了一种适用于单细胞测序的低温解离试剂盒,所述试剂盒包括酶解液、酶解缓冲液1、酶解缓冲液2。本发明还公开了所述试剂盒在单细胞测序中的应用。本发明提供的适用于单细胞测序的低温解离试剂盒将有力的促进低温解离的开展和广泛应用,进一步提升单细胞测序数据质量。本发明提供的试剂盒成分可以直接使用,操作人员不需要再进行解离液的配置;提升效率的同时,使操作步骤实现“标准化”,更有利于避免因为人为配置带来的操作误差,提升数据质量。

    一种筛选与研究目的相关的关键基因、关键蛋白集的方法

    公开(公告)号:CN112634982A

    公开(公告)日:2021-04-09

    申请号:CN202011320196.4

    申请日:2020-11-23

    Abstract: 本发明公开了一种筛选与研究目的相关的关键基因、关键蛋白集的方法,包括以下步骤:对不同组学数据内容,以差异基因/蛋白或差异基因/蛋白并集为总目标集,筛选出与研究相关的指标,根据所述指标的生物学意义进行赋值;使用一套支持自定义修改和权重设置的打分机制,对总目标集的各个指标进行综合打分;对综合打分的topN基因/蛋白,进行表达和功能上的复现和展示,根据结果返回验证筛选的准确性。本发明不仅可以通过筛选出的top目标集的表达和功能复现实现自我验证和自我完善,也可以通过目标筛选数据集的积累形成字典不断丰富和完善,从而使得整套方法更趋准确和可靠。

    一种适用于小鼠心脏组织单细胞测序的组织冷冻及解冻方法

    公开(公告)号:CN112438252A

    公开(公告)日:2021-03-05

    申请号:CN202011313130.2

    申请日:2020-11-20

    Abstract: 本发明公开了一种适用于小鼠心脏组织单细胞测序的组织冷冻及解冻方法。本发明所述的方法可以解决目前缺少适用于小鼠心脏组织单细胞测序的组织冻存方法这一问题,填补目前的技术空白,将有力地促进单细胞测序技术在模式动物中的广泛应用;本发明所述方法采用瞬时速冻技术,在极短的瞬间将组织样本冷冻,避免梯度降温过程中因为细胞仍然具有一定活性而造成冻存过程中转录组发生改变,结果更加准确可靠;本发明所述的方法避免进行解离、梯度冻存的复杂操作,在40分钟内即可完成组织样本的冻存,时间大大缩短,提高效率,便于开展大量样本的冻存。

    一种降低文库冗余度的膜系统表达文库及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN110396515A

    公开(公告)日:2019-11-01

    申请号:CN201910333128.2

    申请日:2019-04-24

    Abstract: 本发明公开了一种降低文库冗余度的膜系统表达文库及其构建方法和应用,所述构建方法通过增加用于反转录的起始总RNA量,无需使用PCR扩增步骤,从而可以减少冗余序列的产生;使用新的终载体质粒pSPR3na,后续可一步生成次级文库并可以多次生成;本发明所述构建方法可以实现降低酵母文库序列冗余度并可以反复生成次级文库的目的。本发明还公开了所述膜系统表达文库在进行膜蛋白-膜蛋白、膜蛋白-可溶性蛋白间的互作研究,用于表达文库的筛选,用于两个已知蛋白(其中一个属于膜蛋白)间互作关系的研究中的应用。本发明还公开了一种新的酵母文库终载体质粒。

    一种稳定表达外源性GLP-1基因的人脐带源间充质干细胞株

    公开(公告)号:CN104805058A

    公开(公告)日:2015-07-29

    申请号:CN201410032846.3

    申请日:2014-01-23

    Inventor: 王树伟

    Abstract: 本发明涉及基因制备与细胞培养技术领域,具体涉及一种稳定表达外源性GLP-1基因的人脐带源间充质干细胞株,包括从人脐带中分离克隆出人脐带源间充质干细胞,采用pCDNA3.1真核表达质粒为载体,将外源性GLP-1基因转入人脐带源间充质干细胞,并经过G418加压筛选培养获得。本发明的稳定表达外源性GLP-1基因的人脐带源间充质干细胞株,解决了目前GLP-1蛋白在治疗II型糖尿病时存在的GLP-1蛋白易被降解和其自身半衰期短,必须持续给药才能用于治疗II型糖尿病不足。

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