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公开(公告)号：CN101705248B
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN200910218982.0
申请日：2009-11-16
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种利用转录因子转染牛体细胞产生诱导多能干细胞(iPSCs)的方法，具体包括下列步骤：1)牛皮肤成纤维细胞的分离与培养；2)牛维持多能性基因转录因子的克隆及其逆转录病毒载体的构建；3)逆转录病毒的包装与准备；4)逆转录病毒感染牛皮肤成纤维细胞以及牛的诱导性多能干细胞的获得。本发明首次采用脱细胞后人羊膜作为支持物代替小鼠胚胎成纤维细胞来维持牛iPSCs体外增殖并长期保持未分化的多能性状态。这种采用基因诱导产生多能性干细胞的方法，不但解决了动物特别是如牛、羊、猪等家畜多能性干细胞难以获得的技术难题，而且避免了应用鼠胚胎成纤维细胞作为干细胞的饲养层所带来的异种动物细胞污染问题。
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公开(公告)号：CN101974488A
公开(公告)日：2011-02-16
申请号：CN201010204356.9
申请日：2010-06-21
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种永生化的猪胰腺干细胞系及其构建与分化方法，所述的永生化的猪胰腺干细胞系，是以猪胰腺干细胞作为宿主细胞，转染pCI-neo-hTERT真核表达载体，经过G418筛选得到的表达人端粒酶逆转录酶且具有多向分化潜能的转化体。该细胞系在体外传代50代以上仍有较好的活力，保持分裂增殖，不发生衰老和凋亡，是一种永生化的细胞系。将其经过诱导后能够分化形成功能性胰岛细胞团，将其移植到患有糖尿病小鼠模型的体内，能降低其血糖浓度，在两周内能够维持正常的血糖水平。
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公开(公告)号：CN101121926A
公开(公告)日：2008-02-13
申请号：CN200710018160.9
申请日：2007-07-02
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了角膜缘干细胞无血清培养基，由下述质量百分比的原料制成的：DMEM/F12 60ml～90ml、BSA 0.5g～4g、EGF 1μg～4μg、insulin 0.1mg～1mg、氢化可酸松20ug～100ug、霍乱毒素1ug～10ug、转铁蛋白0.1mg～1mg、亚硒酸钠0.1ug～1ug、GCLCM 10ml～40ml、青霉素和链霉素各5×103IU～2×104IU。本发明采用在培养基添加成纤维细胞条件培养液的办法，用激素、细胞因子组合及成纤维细胞条件培养液和BSA补充了营养因子，满足角膜缘干细胞体外长期扩增培养的营养需求，是一种可商品化生产的无血清培养基。
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公开(公告)号：CN1865436A
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200610041977.3
申请日：2006-03-27
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种分离纯化皮肤表皮干细胞的方法，在皮肤组织块培养过程中采用自行设计的培养基能有效抑制成纤维细胞的生长，从组织块四周生长出均一的上皮样细胞，诱发表皮干细胞迁移出原来的微环境，在新生成的上皮样细胞层上重新聚集生长。这类克隆性生长的细胞与其共生的上皮样细胞有明显形态学上的差别。借助解剖镜和玻璃针就能将其挑选出来，进行单独扩增培养。对所获得细胞进行当前同行公认的表皮干细胞分子标志的检测：CK19，β1－integrin，P63，α6－integrin均为阳性，即证明所分选的是纯化的表皮干细胞。本发明克服了传统酶消化法的缺点，直接利用干细胞的生物学行为获得纯化的表皮干细胞，可用于人类和哺乳动物表皮干细胞的分离纯化。
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公开(公告)号：CN1865434A
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200610041978.8
申请日：2006-03-27
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了一种建立成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系的方法，该方法将已脱离关中奶山羊体的耳中部一块0.5cm×0.5cm大小的皮肤，切成0.1～0.2cm×0.1～0.2cm的组织块，按表皮面朝上贴于玻璃或塑料平皿中，加培养基，在37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱内培养，培养后离散成单个细胞，用移胚管将单个细胞移入塑料皿中，用无血清培养基培养，待干细胞增殖至70％～80％融合时，用0.2％胰酶+0.02％EDTA进行消化传代培养，直至传至25代，冷冻大量种子细胞，即为建立的成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系。本发明的方法建立的关中奶山羊皮肤表皮干细胞系，不仅可用于克隆转基因动物的研究和生产，而且可用于该品种的遗传特征研究与保种；同时也是组织工程皮肤研究的理想实验材料。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1563365A
公开(公告)日：2005-01-12
申请号：CN200410025939.X
申请日：2004-03-12
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种分离纯化皮肤表皮干细胞的方法，在皮肤组织块培养过程中采用自行设计的培养基能有效抑制成纤维细胞的生长，从组织块四周生长出均一的上皮样细胞，诱发表皮干细胞迁移出原来的微环境，在新生成的上皮样细胞层上重新聚集生长。这类克隆性生长的细胞与其依赖的滋养层细胞有明显形态学上的差别。借助解剖镜和玻璃针就能将其挑选出来，进行单独扩增培养。对所获得细胞进行当前同行公认的表皮干细胞分子标志的检测：CK19，integrin－β1，p63，integrin－α6均为阳性，即证明所分选的是纯化的表皮干细胞。本发明克服了传统酶消化法的缺点，直接利用干细胞的生物学行为获得纯化的表皮干细胞，可用于人类和哺乳动物表皮干细胞的分离纯化。
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公开(公告)号：CN1563361A
公开(公告)日：2005-01-12
申请号：CN200410025964.8
申请日：2004-03-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了一种成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系，采用组织块培养法和克隆筛选法，分离纯化关中奶山羊表皮干细胞，并采用无血清培养体系，不需滋养层细胞，实现了关中奶山羊表皮干细胞体外长期扩增，传25代冻存。已冻存2～2.5×108个种子细胞。该类细胞体外倍增时间为28～30小时，细胞直径9～13um之间，测定了其生长曲线和克隆形成率。经免疫组织化学法鉴定表明，所分离的表皮干细胞原代表现为OCt－4阳性，证明其具有与ES细胞类似的分化潜能。传代后的表皮干细胞CK19，integrin－β1，P63阳性，具有表皮干细胞的典型特性。本发明建立的关中奶山羊表皮干细胞系，是组织工程化皮肤研究的理想实验材料，可用于克隆动物及克隆转基因动物生产。
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公开(公告)号：CN101812480B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN200910218981.6
申请日：2009-11-16
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/867 , C12N5/06 , C12N5/10 , C12N15/12 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种利用转录因子转染牛体细胞产生诱导性多能干细胞(iPSCs)的方法，具体包括下列步骤：1)牛皮肤成纤维细胞的分离与培养；2)牛维持多能性基因转录因子的克隆及其逆转录病毒载体的构建；3)逆转录病毒的包装与准备；4)逆转录病毒感染牛皮肤成纤维细胞以及牛的iPS细胞的获得。本发明首次采用脱细胞后人羊膜作为支持物代替小鼠胚胎成纤维细胞来维持牛iPSCs体外增殖并长期保持未分化的多能性状态。这种采用基因诱导产生多能性干细胞的策略，不但解决了家畜特别是牛多能性干细胞难以获得的技术难题，而且避免了应用鼠胚胎成纤维细胞作为干细胞的饲养层所带来的异种动物细胞污染问题。
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公开(公告)号：CN101974488B
公开(公告)日：2012-11-21
申请号：CN201010204356.9
申请日：2010-06-21
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种永生化的猪胰腺干细胞系及其构建与分化方法，所述的永生化的猪胰腺干细胞系，是以猪胰腺干细胞作为宿主细胞，转染pCI-neo-hTERT真核表达载体，经过G418筛选得到的表达人端粒酶逆转录酶且具有多向分化潜能的转化体。该细胞系在体外传代50代以上仍有较好的活力，保持分裂增殖，不发生衰老和凋亡，是一种永生化的细胞系。将其经过诱导后能够分化形成功能性胰岛细胞团，将其移植到患有糖尿病小鼠模型的体内，能降低其血糖浓度，在两周内能够维持正常的血糖水平。
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公开(公告)号：CN101705247A
公开(公告)日：2010-05-12
申请号：CN200910218980.1
申请日：2009-11-16
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种利用转录因子转染牛体细胞产生诱导多能干细胞(iPSCs)的方法，具体包括下列步骤：1)牛皮肤成纤维细胞的分离与培养；2)牛维持多能性转录因子基因的克隆及其逆转录病毒载体的构建；3)逆转录病毒的包装与准备；4)逆转录病毒感染牛皮肤成纤维细胞以及牛的诱导性多能干细胞的获得。本发明首次采用脱细胞后人羊膜作为支持物代替小鼠胚胎成纤维细胞来维持牛iPSCs体外增殖并长期保持未分化的多能性状态。这种采用基因诱导产生多能性干细胞的方法，不但解决了动物特别是如牛、羊、猪等家畜多能性干细胞难以获得的技术难题，而且避免了应用鼠胚胎成纤维细胞作为干细胞的饲养层所带来的异种动物细胞污染问题。
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