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公开(公告)号：CN110887963B
公开(公告)日：2022-12-30
申请号：CN201911162737.2
申请日：2019-11-25
Applicant: 江苏南农高科技股份有限公司 , 美国普赛(PROCELL)生物高科技有限责任公司 , 湖南农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577 , C07K16/08 , C12N5/20
Abstract: 本发明涉及一种PCV2病毒样颗粒夹心定量ELISA检测法及其应用。利用猪圆环病毒2型PCV2d VLPs免疫小鼠，筛选杂交瘤细胞，制备的抗体可以特异性识别PCV2(PCV2b、PCV2d均可识别)，可用于WB、IFA等PCV2相关检测；利用该抗体包被ELISA检测时发现不与Cap蛋白发生反应，能够用于区分VLPs和Cap。基于该单克隆抗体经过一系列反应条件的优化建立了夹心ELISA，可用于PCV2 VLPs的特异性定量以及定性，检测最低浓度可达到62.5ng/ml，灵敏度高，相关系数R2为0.992，定量准确性好，适用于PCV2b与PCV2d VLPs的定量，可应用于PCV2不同基因型VLPs的定量、组装效率鉴定以及PCV2病毒侵染鉴定。
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公开(公告)号：CN106399371B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610823307.0
申请日：2016-09-14
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV‑LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。
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公开(公告)号：CN109265521A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201811067175.9
申请日：2018-09-13
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C07K14/01 , C07K19/00 , C12N15/11 , C12N15/70 , G01N33/68 , G01N33/569 , A61K39/12 , A61K39/23 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种PCV2Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用，PCV2Loop EF区的突变体，其Loop EF区第133位丙氨酸形成供外源表位替换和/或插入的可突变位点以便在体外组装成完整的VLPs。电镜结果表明，Loop EF中第133位氨基酸的突变不影响VLPs组装，表明PCV2VLPs Loop EF区展示外源抗原表位具有可行性。为Loop EF区结构功能研究奠定基础，同时也为展示外源表位构建嵌合型多价疫苗研究提供重要的实验依据。
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公开(公告)号：CN119307595A
公开(公告)日：2025-01-14
申请号：CN202411393650.7
申请日：2024-10-08
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种LAMP‑CRISPR检测体系及其应用。所述LAMP‑CRISPR检测体系包括LAMP扩增体系和CRISPR检测体系，所述LAMP扩增体系包括特异性扩增PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV G9的引物；CRISPR检测体系包括Cas蛋白、crRNA‑F/R和ssDNA探针；所述crRNA‑F/R序列如SEQ ID NO.23‑28、SEQ ID NO.29‑34、SEQ ID NO.35‑40或SEQ ID NO.41‑42所示；ssDNA探针的序列如SEQ ID NO.43‑44所示。本发明通过体系的优化，有效解决了多重检测体系检测的准确度不高的问题。
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公开(公告)号：CN108410907B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)‑2A‑Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR‑gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109265521B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201811067175.9
申请日：2018-09-13
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C07K14/01 , C07K19/00 , C12N15/11 , C12N15/70 , G01N33/68 , G01N33/569 , A61K39/12 , A61K39/23 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种PCV2Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用，PCV2Loop EF区的突变体，其Loop EF区第133位丙氨酸形成供外源表位替换和/或插入的可突变位点以便在体外组装成完整的VLPs。电镜结果表明，Loop EF中第133位氨基酸的突变不影响VLPs组装，表明PCV2VLPs Loop EF区展示外源抗原表位具有可行性。为Loop EF区结构功能研究奠定基础，同时也为展示外源表位构建嵌合型多价疫苗研究提供重要的实验依据。
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公开(公告)号：CN106434750A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N2800/107 , C12N2800/30
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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公开(公告)号：CN105907752A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610300662.X
申请日：2016-05-09
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/11 , C12N7/00 , C12N15/10 , C12N2750/10052 , C12Q2531/125
Abstract: 本发明公开一种基于体外滚环复制的PCV2毒株感染性克隆构建试剂盒及方法。所述基于体外滚环复制的PCV2毒株感染性克隆构建试剂盒中含有如下引物：PCV2特异性上游引物：5’?CCATATGAAATAAATTACTGAG?3’（SEQ ID NO.1）；PCV2特异性下游引物：5’?CAGCGCACTTCTTTCGTTTTCAG?3’（SEQ ID NO.2）；随机引物：5′?NNNNNN?3′（SEQ ID NO.3）。PCV2毒株感染性克隆的方法是利用上述引物对PCV2 DNA进行多引物滚环扩增后得到PCV2全基因组，然后将全基因组通过单酶切分离纯化后连接，并重新环化，构建成PCV2毒株感染性克隆。
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公开(公告)号：CN115094060A
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202210727672.7
申请日：2022-06-23
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 一种基于LAMP‑CRISPR/Cas12a可视化检测PCV2核酸的试剂盒，包括CRPSPR‑Cas12检测体系和LAMP扩增引物，是将LAMP检测方法和CRPSPR‑Cas12检测方法相结合，建立的可实现猪圆环病毒2型核酸可视化检测方法。本检测方法具有优良的特异性、灵敏性和可重复性，且操作简便，无需昂贵的仪器设备，并具有可视化优势，将该检测方法向猪场及检测单位推广应用，有利于实现猪圆环病毒2型相关病的快速诊断。
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公开(公告)号：CN104498439B
公开(公告)日：2017-10-03
申请号：CN201410712094.5
申请日：2014-11-28
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/20 , B01D15/38 , C12M1/00
Abstract: 本发明提供了一种杂交瘤细胞、PCV2单克隆抗体及其应用。本发明通过创造性地采用PCV2病毒样颗粒作为免疫原，由于PCV2病毒样颗粒是更接近于正常PCV2病毒的蛋白组装而成的空壳结构，能够通过和正常病毒感染一样的途径递呈给免疫细胞，诱导免疫系统产生免疫保护反应，使得本发明的杂交瘤细胞分泌得到的单克隆抗体相比PCV2抗原蛋白单克隆抗体具有更高特异性和灵敏度。
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