公开(公告)号：CN112575011B

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202011474598.X

申请日：2020-12-14

Applicant: 江苏阿尔法药业股份有限公司

Inventor： 陈本顺 ,  石利平 ,  何伟 ,  李大伟 ,  徐春涛 ,  马骧 ,  钱若灿 ,  万新强 ,  张维冰 ,  江涛 ,  尹斌

IPC: C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12P17/18

Abstract: 本发明涉及药物合成及酶工程技术领域，尤其是一种纳呋拉啡中间体的生物合成方法及生物酶，该方法由化合物II作为起始原料，在缓冲液、助溶剂、辅酶PLP、氨基供体的存在下，经生物酶催化转化为化合物I，其反应路线为，本发明的合成方法减少了纳呋拉啡中间体生产过程中化学催化剂的使用，方法简单，反应条件温和，对环境优化，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN112645952B

公开(公告)日：2021-10-01

申请号：CN202011549680.4

申请日：2020-12-24

Applicant: 江苏阿尔法药业股份有限公司

Inventor： 陈本顺 ,  叶金星 ,  何伟 ,  石利平 ,  徐春涛 ,  钱若灿 ,  孙伟振 ,  张维冰 ,  尹斌 ,  唐旻奕 ,  邱磊

IPC: C07D473/34 ,  C12P17/18

Abstract: 本发明涉及基因工程与酶工程技术领域，尤其是一种(R)‑(+)‑9‑(2‑羟丙基)腺嘌呤的合成方法，其合成路线如下：具体为，化合物Ⅳ中加入X来成盐，所述X为盐酸、硫酸、磷酸或柠檬酸；然后以化合物Ⅲ为底物，在pH 6.0的PB缓冲溶液中，在辅酶和辅酶循环酶的存在下，以羰基还原酶为催化剂，不对称还原Ⅲ，获得化合物Ⅱ；然后加入碱获得化合物Ⅰ；其中，所述羰基还原酶基因的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明进行底物成盐增加溶解性后进行反应，48h反应完全，催化率≥1，ee值＞99％，实现了(R)‑(+)‑9‑(2‑羟丙基)腺嘌呤的绿色经济合成。

公开(公告)号：CN114457099B

公开(公告)日：2023-12-15

申请号：CN202111556110.2

申请日：2021-12-18

Applicant: 江苏阿尔法药业股份有限公司

Inventor： 陈本顺 ,  李大伟 ,  徐春涛 ,  何伟 ,  尹强 ,  张维冰 ,  邱磊 ,  江涛 ,  尹斌

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，所述核26 34心肽链为Lys Arg GLP‑1(9‑37)、Lys26Arg34GLP‑1(10‑37)或Lys26Arg34GLP‑1(11‑37)；具体方法为，通过将核心肽链与融合蛋白所需的内切酶或其突变体耦联获得融合蛋白DNA序列，然后构建融合蛋白的表达载体，载入表达细胞，融合蛋白表达后获得包涵体，复性纯化后酶切获得产物。该方法相较于将酶切与复性同时进行，无需额外添加内切酶，成本低，经济高效，且对环境更加友好。

公开(公告)号：CN112553173B

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN202011529752.9

申请日：2020-12-22

Applicant: 江苏阿尔法药业股份有限公司

Inventor： 陈本顺 ,  李大伟 ,  何伟 ,  石利平 ,  徐春涛 ,  钱若灿 ,  叶金星 ,  张维冰 ,  万新强 ,  尹斌 ,  徐秋斌

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及医药化学领域，特别是涉及药物中间体的制备领域，更为具体的说是涉及野生氧化酶突变体及其制备方法和应用。所述野生氧化酶突变体为NADH依赖型氧化酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用本发明公开的野生氧化酶突变体能够高效氧化生成(4R‑cis)‑6‑甲醛基‑2,2二甲基‑1,3‑二氧六环‑4‑乙酸叔丁酯。不仅反应条件温和，而且在辅酶系统参与下可以达到无副产物产生的效果，对环境友好，是一种经济、高效的制备方法。

公开(公告)号：CN114457099A

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202111556110.2

申请日：2021-12-18

Applicant: 江苏阿尔法药业股份有限公司

Inventor： 陈本顺 ,  李大伟 ,  徐春涛 ,  何伟 ,  尹强 ,  张维冰 ,  邱磊 ,  江涛 ,  尹斌

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，所述核心肽链为Lys26Arg34GLP‑1(9‑37)、Lys26Arg34GLP‑1(10‑37)或Lys26Arg34GLP‑1(11‑37)；具体方法为，通过将核心肽链与融合蛋白所需的内切酶或其突变体耦联获得融合蛋白DNA序列，然后构建融合蛋白的表达载体，载入表达细胞，融合蛋白表达后获得包涵体，复性纯化后酶切获得产物。该方法相较于将酶切与复性同时进行，无需额外添加内切酶，成本低，经济高效，且对环境更加友好。

公开(公告)号：CN113512569A

公开(公告)日：2021-10-19

申请号：CN202110272153.1

申请日：2021-03-12

Applicant: 江苏阿尔法药业股份有限公司

Inventor： 陈本顺 ,  叶金星 ,  石利平 ,  张维冰 ,  何伟 ,  徐春涛 ,  程瑞华 ,  马跃跃 ,  尹斌 ,  陆波

IPC: C12P13/00 ,  C07C221/00 ,  C07C225/16

Abstract: 本发明涉及生物制药技术领域，尤其是一种洛匹那韦中间体酶催化合成方法，包括以下步骤：1)化合物Ⅳ与三氟乙酸在溶剂中反应，制得化合物Ⅲ；然后向反应瓶中加入碳酸氢钠、水、溶剂和化合物Ⅲ，开启搅拌，降温至‑5～5℃左右，向反应瓶内加入溴化钾和Tempo，滴加次10％氯酸钠溶液，TLC监控反应体系；反应完全后，加入硫代硫酸钠溶液，搅拌，水层用溶剂萃取，合并有机层，浓缩至干，重结晶，析晶后抽滤，干燥，得到化合物II；2)以化合物II为底物，在酮羰基还原酶、辅酶、酶循环氢供体、辅酶循环酶、助溶剂和缓冲液的存在下，进行生物催化反应生成洛匹那韦中间体，即化合物I。本发明的合成方法反应条件温和，对环境友好，实现了手性中间体的绿色合成。