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公开(公告)号：CN114774420B
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202210454378.3
申请日：2022-04-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82
Abstract: 本发明公开了一种水稻增强子及基于CRISPR/Cas9技术评估水稻增强子活性的方法，水稻增强子，序列如SEQ ID NO.1。获取增强子，长度为461 bp；LOC_Os07g34589基因的启动子中，分离得到62 bp mini启动子序列；构建负对照载体，使用LOC_Os07g34589基因的两个mini启动子序列反向连接，分别驱动Cas9蛋白和sgRNA表达；构建增强子检测载体，在上述负对照载体中，两个mini启动子中间插入igENH1增强子序列；水稻原生质体的制备与转化；转化后通过分析增强子活性。所述水稻增强子具有较好的增强转录效果。
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公开(公告)号：CN112553197B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN202011332993.4
申请日：2020-11-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/82 , C12N15/65 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明公开了一种有活性的落叶松启动子、获取及鉴定方法。启动子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板，扩增得到430bp的扩增产物，即得。将这一段DNA分子驱动GFP荧光蛋白基因表达，可观察到荧光信号，证实该序列为启动子。本发明提供的落叶松启动子序列，本质是DNA分子，430bp，能够启动转录。
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公开(公告)号：CN111254160A
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN202010234221.0
申请日：2020-03-30
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，包括如下步骤：(1)构建载体：正对照载体采用p1300LV载体，同时构建相应的负对照载体；(2)增强子的分离克隆及表达载体构建：选取增强子序列，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增得到目的片段，再与BsaI酶线性化的负对照载体连接，得到增强子表达载体；(3)制备水稻原生质体；(4)水稻原生质体的转化：将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养，进行转化；(5)显微镜观察荧光信号。本发明方法首次提出了通过水稻瞬时转化验证增强子活性的方法，高效，快捷。
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公开(公告)号：CN111254160B
公开(公告)日：2021-10-19
申请号：CN202010234221.0
申请日：2020-03-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/113 , C12N15/65 , A01H5/00 , A01H6/46
Abstract: 本发明公开了一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，包括如下步骤：(1)构建载体：正对照载体采用p1300LV载体，同时构建相应的负对照载体；(2)增强子的分离克隆及表达载体构建：选取增强子序列，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增得到目的片段，再与BsaI酶线性化的负对照载体连接，得到增强子表达载体；(3)制备水稻原生质体；(4)水稻原生质体的转化：将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养，进行转化；(5)显微镜观察荧光信号。本发明方法首次提出了通过水稻瞬时转化验证增强子活性的方法，高效，快捷。
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公开(公告)号：CN113061651A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110376568.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6869 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明涉及一种LPS感染后检测并调控鸡RIPK2基因甲基化的方法，包括以下步骤：步骤1）、LPS感染鸡巨噬细胞HD11，检测RIPK2基因表达量变化；步骤2）、重亚硫酸氢盐处理LPS感染前后的基因组；步骤3）、鸡RIPK2基因启动子区CpG岛片段PCR扩增和测序分析；步骤4）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理转染鸡RIPK2启动子质粒的鸡HD11细胞；步骤5）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理鸡HD11细胞，检测RIPK2基因表达量；通过本发明，对缓解应激性病理损伤和提高家禽健康具有重要的实践意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112553197A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011332993.4
申请日：2020-11-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/82 , C12N15/65 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明公开了一种有活性的落叶松启动子、获取及鉴定方法。启动子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板，扩增得到430bp的扩增产物，即得。将这一段DNA分子驱动GFP荧光蛋白基因表达，可观察到荧光信号，证实该序列为启动子。本发明提供的落叶松启动子序列，本质是DNA分子，430bp，能够启动转录。
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公开(公告)号：CN112522265A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011333330.4
申请日：2020-11-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/82 , C12N15/65 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明公开了一种具有增强子功能的落叶松DNA分子、获取及鉴定方法。增强子DNA序列如SEQ ID NO.1。用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板，扩增得到574bp的扩增产物，即得。mini35s启动子单独不能启动的报告基因GFP表达，由于增强子可远距离促进转录的特征，当有功能的增强子插入该载体中后，其可以促进荧光蛋白转录，从而观察到荧光。本发明提供的落叶松增强子序列，本质是DNA分子，574bp，能够促进转录。
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公开(公告)号：CN111549026A
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN202010309791.1
申请日：2020-04-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/65 , C12N15/82
Abstract: 本发明公开了一种水稻增强子及鉴定方法。该水稻增强子为622bp的DNA分子，序列如SEQ ID NO.1。构建OsENHANCER1 reporter载体、正对照载体CaMV35S-GFP reporter(SEQ ID NO.2)和负对照载体Enhancerless reporter(SEQ ID NO.3)，通过水稻原生质体转化进行鉴定。本发明增强子在基因转录过程中发挥重要作用，鉴定方法快速，便捷。
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公开(公告)号：CN114774420A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210454378.3
申请日：2022-04-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82
Abstract: 本发明公开了一种水稻增强子及基于CRISPR/Cas9技术评估水稻增强子活性的方法，水稻增强子，序列如SEQ ID NO.1。获取增强子，长度为461 bp；LOC_Os07g34589基因的启动子中，分离得到62 bp mini启动子序列；构建负对照载体，使用LOC_Os07g34589基因的两个mini启动子序列反向连接，分别驱动Cas9蛋白和sgRNA表达；构建增强子检测载体，在上述负对照载体中，两个mini启动子中间插入igENH1增强子序列；水稻原生质体的制备与转化；转化后通过分析增强子活性。所述水稻增强子具有较好的增强转录效果。
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