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公开(公告)号：CN118291537A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410379524.X
申请日：2024-03-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/41 , C07K14/085 , C12N15/11 , C12N7/01 , A61K39/125 , A61P31/14 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种塞尼卡病毒‑3A负标记病毒的构建方法及其应用，以塞内卡病毒cDNA全长感染性克隆重组质粒pCMV‑rSVA‑SD作为框架，构建含3A蛋白部分缺失的SVA全长cDNA克隆重组全长质粒，再将所述的重组全长质粒转染BHK‑21细胞进行病毒拯救获得塞尼卡病毒A‑3A负标记病毒；所述的3A蛋白部分缺失为3A蛋白4‑9位、76‑82位或80‑87位氨基酸缺失。本研究构建的3A蛋白负标记病毒为后续发展塞内卡病毒A鉴别诊断疫苗的候选毒株奠定实验基础。
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公开(公告)号：CN109762792B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN201910046125.0
申请日：2019-01-18
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株及其应用，本发明以高致病性PRRSV TJM‑F92疫苗弱毒株的全长感染性cDNA克隆和类NADC30亚型毒株FJ1402为基础，利用反向遗传技术，构建得到了猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株。该嵌合毒株经试验验证，在Marc‑145细胞上病毒生长速度及病毒滴度低于其原始毒株TJM‑F92，毒力低，对HP‑PRRSV毒株BB0907及类NADC30毒株FJ1402均有较好的免疫保护作用，可对高致病性毒株以及类NADC30毒株感染提供有效的交叉免疫保护，为该病新型广谱疫苗的研制奠定了重要基础。
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公开(公告)号：CN114014916A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111422353.7
申请日：2019-01-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/005 , G01N33/68 , C07K16/08
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒3型Cap重组蛋白、其编码基因及在ELISA抗体检测中的应用，本发明采用PCR方法将PCV3 Cap基因中表达第60‑120aa的基因片段删除，得到了PCV3 Cap重组蛋白的编码基因，将该编码基因克隆至pET32a，再转化至Rosseta感受态细胞，经IPTG诱导表达，可以得到PCV3 Cap重组蛋白。该蛋白呈可溶性表达，可与His标签抗体结合，采用亲和层析方法便于纯化。采用该重组蛋白对猪进行免疫，可以得到多克隆抗体，该多克隆抗体效价高，与PCV3有相似的抗原性。以该重组蛋白包被酶标板，对PCV3进行间接ELISA抗体检测，具有敏感性、特异性和重复性好等优势。
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公开(公告)号：CN113274381A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110790437.X
申请日：2021-07-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: A61K31/343 , A61P31/14 , A23K20/121 , A23K50/30
Abstract: 本发明属于兽药技术领域，提供了一种松萝酸在制备防治猪流行性腹泻药物中的应用。松萝酸通过剂量依赖的方式发挥抗PEDV的作用，对PEDV不同毒株均具有明显的抑制效果，其抗病毒作用主要在病毒的复制阶段发挥作用。在研究中发现PEDV感染会促进细胞自噬，且自噬对病毒复制具有促进作用，而松萝酸可以抑制Vero细胞自噬，并通过自噬促进剂3‑MA和抑制剂雷帕霉素的作用，发现松萝酸可能通过抑制细胞的自噬过程从而发挥抗PEDV作用。本发明首次揭示了松萝酸对PEDV的抑制作用及可能的抑制机制，为PEDV的防治提供了新的备选药物。
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公开(公告)号：CN107375922B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201710597663.X
申请日：2017-07-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种新的水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗，本发明筛选并设计了CP974S、CP934S、CP974M和CP四种水性佐剂，制备PCV2灭活疫苗，小鼠和猪体免疫试验结果显示，CP974S和CP934S佐剂对PCV2灭活抗原具有较强免疫佐剂作用，CP974S水佐剂疫苗猪体免疫保护效力优于PCV2进口ISA206佐剂灭活疫苗。以杆状病毒表达的PCV2Cap重组蛋白为基础，配制不同佐剂疫苗，小鼠和猪体免疫试验发现，CP974S和CP934S两种水性佐剂对PCV2Cap重组蛋白也有较强免疫佐剂作用，CP974S佐剂疫苗猪体免疫效果优于进口PCV2Cap亚单位疫苗。CP974S水佐剂填补了我国猪用水溶性佐剂的空白，以此研制的PCV2疫苗安全有效，具有重要应用前景。
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公开(公告)号：CN109762792A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910046125.0
申请日：2019-01-18
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株及其应用，本发明以高致病性PRRSV TJM-F92疫苗弱毒株的全长感染性cDNA克隆和类NADC30亚型毒株FJ1402为基础，利用反向遗传技术，构建得到了猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株。该嵌合毒株经试验验证，在Marc-145细胞上病毒生长速度及病毒滴度低于其原始毒株TJM-F92，毒力低，对HP-PRRSV毒株BB0907及类NADC30毒株FJ1402均有较好的免疫保护作用，可对高致病性毒株以及类NADC30毒株感染提供有效的交叉免疫保护，为该病新型广谱疫苗的研制奠定了重要基础。
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公开(公告)号：CN109762052A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910046124.6
申请日：2019-01-18
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒3型Cap重组蛋白及其编码基因和应用，本发明采用PCR方法将PCV3 Cap基因中表达第1-120aa或60-120aa的基因片段删除，得到了PCV3 Cap重组蛋白的编码基因，将该编码基因克隆至pET32a，再转化至Rosseta感受态细胞，经IPTG诱导表达，可以得到PCV3 Cap重组蛋白。该蛋白呈可溶性表达，可与His标签抗体结合，采用亲和层析方法便于纯化。采用该重组蛋白对猪进行免疫，可以得到多克隆抗体，该多克隆抗体效价高，与PCV3有相似的抗原性。以该重组蛋白包被酶标板，对PCV3进行间接ELISA抗体检测，具有敏感性、特异性和重复性好等优势。
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公开(公告)号：CN105400745B
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201510886074.4
申请日：2015-12-04
Applicant: 南京农业大学 , 江苏南农高科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程毒株及灭活疫苗和疫苗的制备方法，毒株是通过对高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株进行定点突变，使其GP5第35位和第44位的糖基化位点缺失的方式构建而成；灭活疫苗的有效成分为灭活的该毒株病毒液。本发明首次采用过氧化氢为灭活剂，通过过氧化氢灭活浓度、时间优化和免疫佐剂的优化获得新型灭活疫苗。与其他灭活剂和佐剂相比，该毒株制备的新型灭活疫苗可以有效诱导仔猪产生PRRSV细胞免疫应答和中和抗体，保护仔猪抵抗PRRSV强毒攻击的效果更好。该基因工程灭活疫苗比传统灭活疫苗更为有效，相比商品化的PRRSV活疫苗更为安全，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN108559754A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201810147635.2
申请日：2018-02-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因修饰的重组蛋白及其应用，密码子优化的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白编码基因，是如下(1)～(3)中的任一种DNA分子：(1)由序列表中SEQ ID NO.3所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的DNA分子；(3)与(1)限定的DNA序列至少具有90％同源性且编码猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的DNA分子。本发明首次通过删除跨膜区基因片段和大肠杆菌偏嗜性密码子基因修饰，人工合成基因片段，构建了原核表达载体，成功获得高效表达的GP5重组蛋白，兔体免疫试验证明，该蛋白具有较好免疫特性。
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