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公开(公告)号：CN106834236A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201610097514.2
申请日：2016-02-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/00 , C12N15/85 , A61K39/245 , A61P31/22 , C12R1/93
CPC classification number: C12N7/00 , C07K14/005 , C12N2710/16721 , C12N2710/16722 , C12N2710/16734 , C12N2710/16751
Abstract: 本发明涉及一种猪伪狂犬病毒(PRV)变异株ZJ01的TK/gE/gI基因缺失毒株及其应用，所述毒株为PRV ZJ01毒株的TK/gE/gI基因缺失毒株ZJ01ΔTK/gE/gI(简称ZJ01R)，体外传代试验结果显示，重组病毒ZJ01R和PRV ZJ01毒株的gE/gI基因缺失毒株ZJ01ΔgE/gI与亲本病毒ZJ01产生的细胞病变一致，病毒滴度与ZJ01毒株相仿；重组病毒ZJ01R目的基因缺失区持续稳定存在，没有出现回复性突变，猪体免疫及攻毒保护试验表明，重组病毒ZJ01R免疫后，猪体无临床症状及病理变化产生，免疫21天后即可产生较高水平的PRV中和抗体，能够抵御致死性PRV变异毒株ZJ01的攻击感染。
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公开(公告)号：CN102174086B
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201110053536.6
申请日：2011-03-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了一种猪圆环病毒2型重组Cap蛋白和亚单位疫苗。一种重组大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白，该蛋白系将截除N端富含精氨酸的核定位信号区域的猪圆环病毒2型Cap蛋白克隆入原核表达载体得到重组表达载体，将该重组表达载体转染大肠杆菌BL21(DE3)，经该重组大肠杆菌BL21(DE3)表达获得。试验证明，本发明构建的重组菌株对外源蛋白表达稳定。使用本发明表达的重组蛋白制备亚单位疫苗，抗原纯度高，安全性好，且对猪等动物没有致病性，容易通过安全性评价。
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公开(公告)号：CN102363770A
公开(公告)日：2012-02-29
申请号：CN201110309066.5
申请日：2011-10-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及融合表达猪圆环病毒2型Cap蛋白和生长抑素SS的重组杆状病毒及重组亚单位疫苗。融合表达猪圆环病毒2型Cap蛋白和生长抑素SS的重组杆状病毒保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2010年12月17日，保藏号：CGMCC No.4459的。一种亚单位疫苗，含有所述的重组杆状病毒rAc-Cap-SS表达的PCV2Cap-SS融合蛋白BCap-SS和佐剂。本发明首次提出了用杆状病毒表达系统融合表达PCV2 Cap蛋白与生长抑素SS该重组杆状病毒对外源蛋白表达稳定，表达的重组蛋白能诱导产生了针对PCV2的特异抗体，并可促进增重。
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公开(公告)号：CN102174086A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110053536.6
申请日：2011-03-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了一种猪圆环病毒2型重组Cap蛋白和亚单位疫苗。一种重组大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白，该蛋白系将截除N端富含精氨酸的核定位信号区域的猪圆环病毒2型Cap蛋白克隆入原核表达载体得到重组表达载体，将该重组表达载体转染大肠杆菌BL21(DE3)，经该重组大肠杆菌BL21(DE3)表达获得。试验证明，本发明构建的重组菌株对外源蛋白表达稳定。使用本发明表达的重组蛋白制备亚单位疫苗，抗原纯度高，安全性好，且对猪等动物没有致病性，容易通过安全性评价。
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公开(公告)号：CN101423823A
公开(公告)日：2009-05-06
申请号：CN200810155241.8
申请日：2008-10-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/40 , C12N15/861 , A61K39/12 , A61P31/14
Abstract: 本发明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒rAd－GF35，属于高新生物技术领域。通过扩增高致病性PRRSV SY0608分离株GP3和GP5蛋白基因，及猪集落细胞刺激因子(GMCSF)全基因序列，并串联克隆入pShuttle－CMV中，与pAdEasy－1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组质粒，转染HEK293A细胞获得了重组腺病毒，成功表达了PRRSV SY0608株GP3，GP5及GMCSF蛋白。该重组毒可以正确表达GMCSF，发挥佐剂作用，从而提高PRRSV GP3、GP5蛋白的免疫活性，能更有效的刺激机体的免疫保护反应。这种重组腺病毒疫苗具有亚单位疫苗的安全性和弱毒疫苗的抗原增殖能力，而具有广泛的开发和应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101423822A
公开(公告)日：2009-05-06
申请号：CN200810155240.3
申请日：2008-10-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SY0608株重组腺病毒，属于高新生物技术领域。把克隆的副猪嗜血杆菌的热休克蛋白HSP70基因克隆入穿梭载体中pShuttle－CMV－GP3－GP5中，与骨架载体pAdEasy－1共转化大肠杆菌BJ5183菌株，转染HEK293－A细胞获得了重组腺病毒rAd－HS35。重组腺病毒能够对外源蛋白进行大量表达的翻译后修饰，能更有效的刺激机体的免疫保护反应，表达出来的HSP在充当免疫佐剂的同时可以促进对表达出来的GP3和GP5蛋白的抗原递呈作用。这种重组腺病毒疫苗具有亚单位疫苗的安全性和弱毒疫苗诱导细胞免疫反应的能力，从而具有广泛的开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN1769435A
公开(公告)日：2006-05-10
申请号：CN200510038694.9
申请日：2005-04-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , A61K39/235 , A61P31/12
Abstract: 本发明猪II型圆环病毒(PCV－2)重组腺病毒和疫苗属于高新生物技术领域。通过PCR技术扩增PCV－2编码Cap蛋白的ORF2全基因序列，并把该基因序列克隆入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle－CMV中，与腺病毒载体系统的骨架载体pAdEasy－1共转化大肠杆菌BJ5183菌株获得重组质粒，重组质粒转染HEK293－A细胞获得了重组腺病毒并成功的进行了噬斑纯化，通过RT－PCR、间接ELISA、Western－blot和IPMA证明构建成功表达了PCV－2Cap蛋白的重组腺病毒rAd－Cap。在该重组毒中可以使PCV－2的Cap蛋白获得正确表达和表达量提高，从而能更有效的刺激机体的免疫保护反应。
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公开(公告)号：CN117467698B
公开(公告)日：2024-12-27
申请号：CN202311218111.5
申请日：2023-09-20
Applicant: 南京农业大学 , 江苏南农高科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的重组质粒及其应用，所述重组质粒为将序列为：SEQ ID No.1的基因序列通过EcoRI和SpeI酶切位点克隆入pBluescript SK载体所得的重组质粒。本发明的重组质粒可在PK‑15细胞中获得成功拯救并能进行连续传代，同时重组PCV3病毒和阳性PCV3病料中的PCV3野毒生物学特性相同，接种细胞后都不能在PK‑15细胞内增殖，重组病毒的构建成功为开展猪体感染实验和后续开发疫苗提供了不可或缺的生物材料，突破了猪体感染实验和疫苗等免疫制剂的开发瓶颈。
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公开(公告)号：CN116338181A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202310292571.6
申请日：2023-03-23
Applicant: 江苏南农高科技股份有限公司 , 南京农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/531
Abstract: 本发明公开了一种间接ELISA方法，所述间接ELISA方法用于检测猪血清样品中的ApxI毒素抗体水平，所述间接ELISA方法包括如下步骤：步骤S1：准备抗原；步骤S2：确定所述ELISA方法的条件；步骤S3：测定阳性标准品获得OD450nm的平均值X和标准差S，确定所述间接ELISA方法的阴阳性临界值；步骤S4：测定待测样品。本发明通过对抗原包被浓度、血清稀释度和作用时间、酶标二抗稀释浓度和作用时间、抗原抗体结合时间、封闭时间、底物显色时间等条件的优化，使其能有效的检测免疫APP疫苗后血清抗体。
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公开(公告)号：CN110613706A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201910951121.7
申请日：2019-10-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种拮抗猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的药物及其应用，本研究采用病毒感染试验，从386种植物来源的天然药物库中首次发现一种PRRSV拮抗药物—黄腐酚(Xanthohumol，Xn)。该药物在Marc-145和PAM细胞上均可有效抑制PRRSV复制。人工合成5种不同分子结构的黄腐酚衍生物，病毒感染试验进一步发现，该药物衍生物Xn-4体外抑制该病毒复制作用最强。仔猪人工感染和药物治疗试验结果显示，Xn-4能够有效地抑制PRRSV病毒血症，减轻感染猪临床症状，显著降低肺部炎症和病理损伤。综合上述结果，证明该药物对猪繁殖与呼吸综合征具有重要预防和治疗作用，有重要应用前景。
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