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公开(公告)号：CN109512469A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811552777.3
申请日：2018-12-19
Applicant: 华南农业大学 , 温氏食品集团股份有限公司
IPC: A61B10/00
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种从猪活体提取子宫腔液外泌体的方法，具体包括以下步骤：S1：对猪进行预处理；S2：沿腹中线切开待手术部位的皮肤和皮下结缔组织；S3：分离皮下脂肪和腹膜，慢慢牵引出子宫；S4：插入并固定冲胚管；S5：使缓冲液向输卵管侧流动，使得子宫冲洗液从冲胚管开口流出即得到子宫腔液；另一侧的子宫采用同样的方法得到子宫腔液。本发明首次公开了一种实现活体收集猪子宫腔液的方法，使用活体收集子宫腔液节约了样品收集的成本，提高了外泌体的回收率，减少了背景杂质的干扰。此外还公开了从该子宫腔液中提取外泌体的方法，该方法步骤简单、成本低且提取的外泌体纯度高。
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公开(公告)号：CN106086068B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201610397567.6
申请日：2016-06-06
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多顺反子、唾液腺特异性表达该多顺反子的载体及其构建方法，所述多基因共表达的多顺反子具有如SEQ ID No:1所示的碱基序列，所述唾液腺特异性表达多顺反子的载体具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，其是以多顺反子真核表达载体pCD‑PXAT和pPB‑mPSP‑neoGFP载体为原料构建得到的。本发明构建的多顺反子能共表达纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶与植酸酶，囊括了常规饲料中NSP酶的所有主要成员和植酸酶，这些酶都能较好的兼容动物胃肠消化道pH环境，具有较好的胃蛋白和胰蛋白酶耐受性，且始终保持较高的活性，克服了传统饲料用酶制剂在加工，生产使用中缺陷和问题，由于是动物自身分泌，几乎不存在成本问题。
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公开(公告)号：CN106086068A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610397567.6
申请日：2016-06-06
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多顺反子、唾液腺特异性表达该多顺反子的载体及其构建方法，所述多基因共表达的多顺反子具有如SEQ ID No:1所示的碱基序列，所述唾液腺特异性表达多顺反子的载体具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，其是以多顺反子真核表达载体pCD‑PXAT和pPB‑mPSP‑neoGFP载体为原料构建得到的。本发明构建的多顺反子能共表达纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶与植酸酶，囊括了常规饲料中NSP酶的所有主要成员和植酸酶，这些酶都能较好的兼容动物胃肠消化道pH环境，具有较好的胃蛋白和胰蛋白酶耐受性，且始终保持较高的活性，克服了传统饲料用酶制剂在加工，生产使用中缺陷和问题，由于是动物自身分泌，几乎不存在成本问题。
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公开(公告)号：CN103710386B
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201310737657.1
申请日：2013-12-26
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了转基因动物的制备方法。本发明将胞浆DNA注射法与piggyBac转座系统介导的基因整合技术结合，建立一种高效简便的转基因动物制备方法。该方法不仅提高了外源基因整合效率，也使试验操作更简便，解决了制备转基因哺乳动物过程中遇到的操作繁琐、难度大、制备效率低的关键问题。本发明建立的高效而简便的转基因动物制备方法无论对促进哺乳动物的转基因育种，还是对促进转基因动物在人类生物医药研究领域的应用都具有重大意义。
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公开(公告)号：CN103468733B
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201310321355.6
申请日：2013-07-26
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/63 , C12N5/10 , C12N15/873 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抗猪圆环病毒2型的表达载体和转基因猪及其构建方法，属于基因工程领域。所述表达载体是通过分别将H1启动子和pPB-sh2序列连接到pUC57-H1质粒上，再将含有loxP-Neo/EGFP基因表达盒的融合片段连接到pPB-H1-sh2上构建得到的。将该载体导入猪的基因组，并采用体细胞核移植技术生产出转基因猪。本发明的表达载体具有piggyBac转座子，极大地提高了转基因效率，且将普通质粒串联重组的转基因整合模式变成了单位点单拷贝整合，更好的模拟生物基因的内环境。构建的转基因猪通过自身合成siRNA来降解PCV2mRNA，可从根本上抑制猪圆环病毒2型的感染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103710386A
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201310737657.1
申请日：2013-12-26
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了转基因动物的制备方法。本发明将胞浆DNA注射法与piggyBac转座系统介导的基因整合技术结合，建立一种高效简便的转基因动物制备方法。该方法不仅提高了外源基因整合效率，也使试验操作更简便，解决了制备转基因哺乳动物过程中遇到的操作繁琐、难度大、制备效率低的关键问题。本发明建立的高效而简便的转基因动物制备方法无论对促进哺乳动物的转基因育种，还是对促进转基因动物在人类生物医药研究领域的应用都具有重大意义。
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公开(公告)号：CN115947730A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202310020555.1
申请日：2023-01-06
Applicant: 华南农业大学 , 广东温氏种猪科技有限公司
IPC: C07D487/04 , C12N5/10 , C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种双靶点抑制剂HDACs/mTORInhibitor1及含有该抑制剂的培养液和应用。通过将该抑制剂添加至克隆胚胎基础培养液PZM‑3中，可高效激活克隆胚胎自噬的发生，有效清除母源mRNA和蛋白，同时提高组蛋白乙酰化水平，有利于转录因子与DNA特异性结合，从而激活胚胎基因组转录，以此来提高克隆胚胎的质量和发育效率。
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公开(公告)号：CN108060117B
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN201711245659.3
申请日：2017-12-01
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明涉及动物克隆方法领域，具体涉及一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法。本发明方法主要包括在猪克隆胚胎的基础培养液中添加母猪的子宫液。本发明方法显著提高了克隆胚胎早期发育的囊胚率和囊胚内总细胞数。通过早期胚胎的转录组测序结果显示添加母猪子宫液培养使克隆胚胎与正常体内受精胚胎之间的差异表达基因数目减少。最为重要的是，通过添加母猪子宫液还提高了克隆胚胎的受体母猪的分娩率和窝均活仔数，表明本发明方法有效地提高了克隆胚胎体内发育的最终效率。
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公开(公告)号：CN109628494A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910062079.3
申请日：2019-01-23
Applicant: 华南农业大学 , 温氏食品集团股份有限公司
IPC: C12N15/90 , C12N9/22 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/907 , A01K67/0276 , A01K2207/15 , A01K2217/07 , A01K2227/108 , A01K2267/02 , C12N9/22
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的冠状病毒抗性克隆猪及其制备方法，该克隆猪的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取特异性靶向pAPN基因第2外显子和第3外显子的gRNA序列，其核苷酸序列依次如SEQ ID No.1‑2所示；制备获得对应gRNA序列的CRISPR‑Cas9打靶载体PX330‑pAPN2和PX330‑pAPN3；(2)将获得的打靶载体PX330‑pAPN2或打靶载体PX330‑pAPN3转入猪胎儿成纤维细胞中，获得pAPN基因编辑细胞系；(3)对pAPN基因编辑细胞系进行体细胞核移植操作，并将重构胚胎移植入代孕受体，通过自然妊娠出生所述克隆猪。本发明可获得猪冠状病毒受体pAPN完全缺失表达的克隆猪，具有抵抗猪冠状病毒感染的能力。
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公开(公告)号：CN108060117A
公开(公告)日：2018-05-22
申请号：CN201711245659.3
申请日：2017-12-01
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/073
CPC classification number: C12N5/0604 , C12N2500/84
Abstract: 本发明涉及动物克隆方法领域，具体涉及一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法。本发明方法主要包括在猪克隆胚胎的基础培养液中添加母猪的子宫液。本发明方法显著提高了克隆胚胎早期发育的囊胚率和囊胚内总细胞数。通过早期胚胎的转录组测序结果显示添加母猪子宫液培养使克隆胚胎与正常体内受精胚胎之间的差异表达基因数目减少。最为重要的是，通过添加母猪子宫液还提高了克隆胚胎的受体母猪的分娩率和窝均活仔数，表明本发明方法有效地提高了克隆胚胎体内发育的最终效率。
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