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公开(公告)号：CN110129349A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910282838.7
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19-tpm质粒和pUC19-RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX-RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX-RP4质粒和pBBR1MCS4-LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110066820A
公开(公告)日：2019-07-30
申请号：CN201910355729.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一种荧光菌株E.coli C600及构建方法与应用。通过构建含有R6k复制子、以两个ISApl1夹着Lux基因簇和亚碲酸盐耐药基因形成的转座单元以及RP4接合转移基因的重组质粒，将所述重组质粒转入其能够复制的宿主菌中得到重组菌株，再将所述的重组菌株与E.coli C600混合培养，即可筛选得到所述的荧光菌株E.coli C600。所述的荧光E.coli C600获得外援DNA的能力不受影响，稳定性强，能够稳定遗传，荧光不会随着细菌传代而丢失，可作为接合实验的受体菌。所述的荧光E.coli C600在质粒接合转移相关领域中能够更高效、直观地鉴别受体菌和接合子，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115232855B
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202210799165.4
申请日：2022-07-08
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种靶向肠道菌群筛选影响黄嘌呤氧化酶活性药物的方法。本发明将来源于机体的肠道菌群作为研究对象，以群体为单位构建体外模型，保持肠道菌群的多样性，研究微生物群落的共同作用，促进更精准的肠道菌群导向性研究，并进一步将药物与肠道菌群共培养后通过快速、易行的实验方法获得初步筛选结果，大大缩短了获得结果的时间，再根据所得结果使用更精密的检测手段进行深入研究，提高了筛选意义。本发明将肠道菌群体外模型与黄嘌呤氧化酶活性抑制实验相结合，提供一种靶向肠道菌群的影响尿酸代谢药物的筛选方法，肠道菌群与尿酸代谢关系的研究还可为相关疾病提供新的临床治疗靶点。
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公开(公告)号：CN115232855A
公开(公告)日：2022-10-25
申请号：CN202210799165.4
申请日：2022-07-08
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种靶向肠道菌群筛选影响黄嘌呤氧化酶活性药物的方法。本发明将来源于机体的肠道菌群作为研究对象，以群体为单位构建体外模型，保持肠道菌群的多样性，研究微生物群落的共同作用，促进更精准的肠道菌群导向性研究，并进一步将药物与肠道菌群共培养后通过快速、易行的实验方法获得初步筛选结果，大大缩短了获得结果的时间，再根据所得结果使用更精密的检测手段进行深入研究，提高了筛选意义。本发明将肠道菌群体外模型与黄嘌呤氧化酶活性抑制实验相结合，提供一种靶向肠道菌群的影响尿酸代谢药物的筛选方法，肠道菌群与尿酸代谢关系的研究还可为相关疾病提供新的临床治疗靶点。
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公开(公告)号：CN110117605B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201910282847.6
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于IS26插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC26‑tpm质粒和pUC26‑RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建p26‑RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切p26‑RP4质粒和pBBR1MCS4‑LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。将本发明中获得的自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，得到荧光标记的大肠杆菌；最后将其与目标菌株共培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高，可用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物中。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115337296B
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202210766494.9
申请日：2022-07-01
Applicant: 华南农业大学
IPC: A61K31/201 , A61K9/107 , A61K47/34 , A61P31/04
Abstract: 本发明属于生物材料技术领域，具体公开了一种抑制耐药质粒水平转移的复合材料及其制备方法和应用。本发明提供了一种抑制耐药质粒水平转移的复合材料，其可以作为耐药质粒接合抑制剂，所述复合材料制备步骤如下：S1.将蓖麻油和异佛尔酮二异氰酸酯搅拌混合，依次加入哌嗪、催化剂搅拌反应，再添加N‑甲基二乙醇胺，反应至溶液难以流动时添加丁酮，反应后冷却，中和；S2.向步骤S1所得反应体系中加入亚油酸，加水乳化，搅拌后提纯得到所述复合材料。所述复合材料具有pH响应特性，能够靶向动物结肠、盲肠给药，可显著抑制耐药质粒在肠道内细菌之间发生接合转移；可作为新型有效质粒抑制剂，为质粒介导的耐药基因水平传播防控提供了新方法。
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公开(公告)号：CN115109791B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202210710412.9
申请日：2022-06-22
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种基于IncQ型质粒泛宿主的功能基因递送载体、构建方法和应用。本发明以pLHM‑10‑1质粒为模板，在mob区和rep区处设计引物进行PCR扩增，以pUC19质粒为模板，在Amp区设计引物进行PCR扩增，将扩增产物进行电泳纯化回收，两片段进行重组，转化至大肠杆菌E.Coli Dh5α感受态细胞复苏，再将其涂布于含有氨苄西林(ampicillin，AMP)的培养基上，挑取单菌落，进行菌落PCR，测序验证得到所述递送载体。本发明的载体质粒具有体积小，宿主范围广，可搭载的功能基因种类丰富、抗性标记替换较为简便等优势，适用于不同功能基因的泛宿主递送。
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公开(公告)号：CN110129349B
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN201910282838.7
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19‑tpm质粒和pUC19‑RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX‑RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX‑RP4质粒和pBBR1MCS4‑LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110079540B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201910282837.2
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110129246A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910355278.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一株供体菌、其构建方法与应用以及质粒抑制剂筛选方法。所述的供体菌包含自杀型荧光质粒和pCRISPR-LUX质粒，该供体菌本身不表达荧光；而所述的自杀型荧光质粒可通过接合转移进入受体菌，由于接合子脱离了失去核酸内切酶活性的Cas9蛋白的抑制而可以表达荧光。本发明还提供了所述的供体菌的构建方法及应用，所述的应用为通过分析接合子的荧光表达情况对接合转移效率进行定量分析或质粒抑制剂的筛选。同时，本发明还提供了一种基于CRISPR/dCas9筛选质粒抑制剂的方法，可实现高通量筛选抑制耐药质粒接合转移的物质，筛选过程高效、方便、快捷，适用范围较为广泛，为克服细菌耐药性提供新的思路和方法。
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