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公开(公告)号：CN102190733A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201110068819.8
申请日：2011-03-22
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了一种无标签结核杆菌融合蛋白ESAT6-RpfE，是序列表中序列2的蛋白质，并提供了其制备方法和制备疫苗的应用。本发明选用的结核分枝杆菌早期分泌蛋白ESAT6，是抗结核免疫反应的主要配体，有较强的免疫原性和免疫反应性。RPF是一种细菌复活生长因子，以自分泌或旁分泌的形式促进休眠菌的复苏和生长，也是细菌生长真正必需的分泌蛋白之一。RPF蛋白是迄今为止发现的第1个能使休眠的细菌恢复生长繁殖能力的分泌型蛋白，是宿主免疫系统识别的靶抗原，能引起较强的免疫应答，刺激宿主机体产生的特异性抗体，能阻断RPF蛋白对MTB的作用，阻止MTB在体内的复苏和复发，因此RPF蛋白可能是预防和控制MTB感染的一种新型途径。
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公开(公告)号：CN102174112A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110028081.2
申请日：2011-01-26
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明涉及一种无标签结核融合蛋白TB10-Ag85B，利用基因工程技术，将结核分枝杆菌的基因TB10.4和Ag85B进行重组融合，构建重组质粒，进行诱导表达，获得重组基因的表达物，最后将重组基因表达物进行纯化，克隆构建了不带有任何标签的结核分枝杆菌融合蛋白TB10.4-Ag85B。本发明的优点在于：解决了融合蛋白所带有的标签会影响到动物实验以及更进一步的临床学试验的后续问题，并且通过利用不同的色谱分析方法使融合蛋白得到了有效的纯化，有望成为结核病预防的候选疫苗。
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公开(公告)号：CN102146430A
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN201110029624.2
申请日：2011-01-27
Applicant: 兰州大学
IPC: C12Q1/04
Abstract: 本发明公开了一种结核分枝杆菌药敏表型检测方法，包含有如下步骤：1）在无菌离心管的管盖内侧加入用甲醇溶解的质量百分浓度为0.2%的刃天青2.5μl-6μl，待甲醇挥发后，将离心管灭菌；2）将待检测的结核分枝杆菌5-50mg接种到7H9-S培养基中；采用比浊法调整菌液浓度，用无菌水或0.9%的生理盐水将菌液浓度调至麦氏比浊1管的浓度，再用7H9-S培养基稀释菌液20倍；3）取稀释后的菌液50-150μl接种到步骤1）所述的离心管中；4）在步骤3）所述的离心管中加入100μl用7H9-S稀释的待检测的抗结核药物溶液,待检测药物浓度为0.01μg/ml-2.5mg/ml；5）将步骤4）所述的离心管盖紧后，于37℃培养6-7天；6）将步骤5）所述的离心管倒置并振荡，待溶液变为蓝色后，37℃培养12-48小时。实验证明，本发明提供的结核分枝杆菌药敏表型检测方法及其在抗结核药物筛选中的应用，方法工作量小，检测时间短，与传统的罗氏培养基药敏检测法比较，准确率高达90%-99%，且生物安全性较好，不会导致结核病的实验室传播，适合大规模的应用，具有很好的应用前景。
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